玉米大豆复合肽的特定酶解及其ACE抑制活性研究

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:huangcui8
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为了利用植物蛋白质资源和提高其营养价值,以生产玉米淀粉和豆油的下脚料——黄粉和豆粕中获得的玉米蛋白、大豆蛋白为原料,经酶法改性制备具有高附加值的生物活性肽产品。本文采用正交试验研究了从黄粉中提取玉米蛋白,并与大豆蛋白复配,采用中性蛋白酶(Nutrase)、碱性蛋白酶(Alcalase)及强碱性蛋白酶酶解,从中优选出制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的条件;比较了玉米肽、大豆肽、玉米大豆复合肽的ACE抑制活性。进一步采用超滤、配位色谱法、RP-HPLC、HPLC-MS/MS、氨基酸分析仪等手段对复合肽进行了分离纯化、成分分析及结构初探,初步探讨了ACE抑制肽的结构与降血压效果的关系;通过体外试验考察了ACE抑制肽对ACE酶活的抑制作用;通过动物一次性给药实验和长期给药实验,考察了ACE抑制肽对自发性高血压大鼠(SHR)血压的影响,比较了复合肽和复配蛋白的功能性质;对复合肽进行了脱盐和脱苦研究,比较了两种脱盐、脱苦方法对复合肽ACE抑制活性的影响;并将复合肽作为食品添加剂应用于生产绿豆糕。结果如下:1.以粗蛋白含量为56.97%玉米黄粉为原料,以碱醇液(由0.1 mol/LNaOH与95%乙醇配制)为提取液,制备浓缩玉米蛋白的正交试验表明:其最佳提取条件为:提取液碱醇比为45/55(v/v),料液比1:15,提取时间2h,温度55℃;在最佳提取条件下,所得浓缩玉米蛋白中粗蛋白含量高达93.14%。2.玉米大豆复合肽降血压活性研究1)酶解正交试验表明:中性蛋白酶、碱性蛋白酶和强碱性蛋白酶分别酶解玉米大豆复配蛋白,对于ACE抑制活性而言,以碱性蛋白酶酶解肽活性最高,ACE抑制率达82.55%,其酶解最佳条件为:[E]/[S]为0.5%,料液比为1:15,酶解时间为4 h时;是极具开发价值的降血压肽。2)比较了玉米肽、大豆肽、玉米大豆复合肽的ACE抑制活性,复合肽优于玉米肽,玉米肽优于大豆肽。复合肽不仅对ACE抑制率最高,达84.02%,且营养价值高,水解时间短,节省能源。3)一次性给药动物试验表明:灌胃复合肽及卡托普利(Captopril)1h后,与对照组相比,高(100 mg/kg)、中(50 mg/kg)剂量给肽组自发性高血压鼠(SHR)的平均血压值极显著下降(p<0.01),低剂量(25 mg/kg)给肽组SHR的平均血压值显著下降(p<0.05)。高剂量给肽组SHR血压降幅最大,降低了17.95 mmHg柱;中剂量给肽组SHR的降幅与卡托普利组(1 mg/kg)接近,降低了10.0 mmHg柱左右;之后各给药组SHR血压值逐步回升,7h后基本恢复到灌胃前的水平。4) 30天长期给药动物实验表明:低(10 mg/kg)、中(25 mg/kg)、高剂量(50 mg/kg)给肽组及给Captopril组(1 mg/kg)SHR,随着时间延长降血压效果越来越明显,从12天后开始中、高剂量给肽组及给Captopril组SHR的血压值降低已达显著或极显著水平,30天时低、中、高剂量组SHR的平均血压值分别下降了8.52mmHg柱、22.20 mmHg柱和24.58 mmHg柱,且高剂量复合肽的降血压效果优于1 mg/kg Captopril,而复合肽对正常血压的wisa-kyoto鼠基本无影响,并且复合肽剂量与SHR的体重呈正相关关系,说明复合肽对SHR不仅具有降血压作用,而且还具有促进生长的作用。3.复合肽的分离纯化、成分分析及结构初探1)经超滤所得玉米大豆复合肽其ACE抑制活性大大提高,复合粗肽和复合肽中Pro,Leu,Phe,Ala等氨基酸的百分比明显高于其原料蛋白,有助于ACE抑制活性提高。经Cu2+-Sephadex G-25柱分离后得到两个级分——复合肽Ⅰ和复合肽Ⅱ,前者的ACE抑制活性明显高于后者,是进行结构分析的目标级分。2)采用HPLC-MS/MS和氨基酸分析,对含量较高级分中的一个肽进行了结构解析,该化合物是氨基酸序列为Leu-Arg-Pro-Asp-Pro的五肽,其端基有助于ACE抑制活性提高。4.碱性蛋白酶酶解玉米大豆复合肽的应用研究1)和玉米大豆复配蛋白相比,玉米大豆复合肽的溶解度大大提高,尤其是在等电点,在不同pH值下溶解度均在90%以上;起泡性和乳化性都得到很大提高;黏度降低,流动性好。2)比较经大孔树脂和阴阳离子交换树脂处理的两种脱盐方法,活性肽经前者处理后,氮回收率、ACE抑制活性和脱盐率均高于后者处理的效果。因而,宜选用大孔树脂脱盐。3)分别用风味酶和β-环状糊精两种方法对复合肽进行脱苦,并考察了风味酶脱苦对ACE抑制活性的影响,在恒温50℃,pH值6.4的条件下,向复合肽中加入[E]/[S]为2.0%的风味酶,处理2 h,脱苦效果最好,ACE抑制活性与未脱苦复合肽接近,且酶法脱苦不会造成氮损失,具有实用价值;在pH值7.0的条件下,当复合肽浓度为5%,添加2.5%β-环糊精,可达到基本无苦味,同时不会造成氮损失。4)当复合肽添加量为2-5%,绿豆粉与白砂糖的配比为3:1时,能生产出品质良好的降血压绿豆糕,并且其降血压活性可以长期保持稳定。
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