研究目的:DDIT3在内质网应激反应中至关重要,能促进细胞凋亡,也与许多炎症和矿化发生发展过程密切相关。牙骨质在保护牙齿免受牙周炎伤害的同时,也为牙周组织中的sharpey纤维提供附着。我们以前的实验结果表明DDIT3与软骨分化和牙齿发育相关,但DDIT3对于牙骨质矿化的作用仍然不清楚。本文通过体外培养成牙骨质细胞(OCCM-30),检测DDIT3对相关基因的蛋白质和信使RNA(m RNA)表达水平的影响,探讨DDIT3是否对成牙骨质细胞矿化过程有影响,并初步探讨相关的分子机制,为临床治疗提供理论指导。材料和方法:体外培养OCCM-30细胞,通过免疫印迹实验(western blot)测量细胞内蛋白质的表达水平,通过实时荧光定量PCR实验(real time q-PCR)测量细胞内信使RNA(m RNA)的表达变化。采用碱性磷酸酶(ALP)染色和ALP活性测试检查OCCM-30细胞矿化过程中ALP的变化。通过小干扰RNA(si RNAs)配合pepmute试剂抑制细胞内IDH1的m RNA转录水平以测量IDH1在成牙骨质细胞矿化中的作用。所有实验都重复至少3次,同时使用Graph Pad Prism软件对所有实验结果进行分析。结果:DDIT3的表达水平在OCCM-30细胞矿化过程中受到抑制。敲低DDIT3能升高矿化相关基因ALP、RUNX2和OCN的m RNA和蛋白质表达水平,这个结果也被ALP染色和ALP活性实验所证实。IDH1的表达水平在野生型OCCM-30细胞的成牙骨质分化过程中上升,敲低DDIT3之后,IDH1的m RNA和蛋白水平升高。使用小干扰RNA抑制IDH1的表达能够部分逆转DDIT3对成牙骨质细胞矿化的作用,表现为矿化相关基因的表达下降。敲低DDIT3能激活NF-κB通路。NF-κB抑制剂BAY 11-7082能够部分逆转因DDIT3敲低所导致的成牙骨质细胞矿化增加和IDH1表达升高。综上所述,我们的实验结果证明DDIT3能通过NF-κB通路影响IDH1,从而影响成牙骨质细胞矿化。结论:DDIT3抑制成牙骨质细胞矿化,其机制可能是通过NF-κB通路抑制IDH1。抑制NF-κB通路或者IDH1之后,DDIT3对成牙骨质细胞矿化的抑制作用被逆转。这些发现提示DDIT3和IDH1可能是牙周炎治疗或者牙周组织修复的潜在靶标。