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戊型肝炎（Hepatitis E,HE）,是由戊型肝炎病毒毒（Hepatitis E Virus,HEV）引起的一种人和多种动物的人兽共患病。一般在亚洲和非洲一些卫生条件较差的发展中国家暴发流行,发达国家则呈散发,我国是主要流行国家。HEV的可以感染多种动物,其中猪是非常重要的宿主,在跨种间感染与传播中起着重要作用。本研究以上海地区猪戊型肝炎主要流行株为标本,以RT-nPCR扩增ORF2基因目的片段,并将其插入到pMD-18 T 5imple载体中,构建克隆载体pMD-ORF2。克隆的基因片段长666 bp,编码222个氨基酸。与部分不同基因型代表株氨基酸序列比对分析发现,与基因型4的同源性最高,亲水性和抗原性较好。对克隆载体pMD-ORF2进行双酶切,将得到的666bp片段以正确的阅读框架定向克隆于pET-30a（+）中,然后将重组质粒转化进宿主菌BL21中,在37℃IPTG诱导1.0 h下该片段获得良好表达。经SDS-PAGE鉴定,其表达的融合蛋白约为33 kD,与预期值相符。经Ni-亲和层析柱纯化后,得到单一的目的蛋白条带。免疫转印试验显示,该重组蛋白可被猪或人HE阳性血清识别,表明该重组蛋白具备HEV天然毒株抗性,且与人HEV存在抗体交叉反应性.重组蛋白尿素洗涤上清作SDS-PAGE和Westernblot,均显示表达的蛋白有良好抗原性。以LHEV中国猪源株ORF2（394-617 aa）基因工程表达蛋白作为包被杭原,猪HEV阳性血清作为第一抗体,以HRP标记的PSA（HRP-SPA）代替酶标抗体作间接ELISA来检测猪血清中的HEV lgG。方阵滴定试验确定,蛋白的最佳包被浓度约为2μg/孔,猪血清的最佳稀释度为1:100,HRP-SPA代替酶标二抗其工作浓度为1:10000,从而建立了间接ELISA方法。随机选取87份猪血清,分别用所建立试剂盒和HEV总抗体检测试剂盒（北京万泰抗原夹心法）两种方法检测HEV,结果表明所建立试剂盒检出IgG 70份阳性（阳性率为80.4%）,万泰试剂盒检出64份IgM及IgG阳性（阳性率为73.5%）,两种方法的符合率为91.4%（70/64）。用所建立试剂盒检测采自上海周边地区猪场的553份猪血清样本中的HEV IgG抗体,调查上海地区HEV的感染状况。结果表明,总阳性率64.56%（357/553）。采取上海猪场61份猪粪,进行RT-PCR检测,检测到10份阳性,测序发现10个克隆均为4型,说明上海主要流行株是基因4型。