目的:制备抗PD-L1靶向脂质微泡,检测微泡基本特性及靶向聚集性,通过体内实验,探讨超声介导抗PD-L1靶向微泡联合顺铂对宫颈癌移植瘤的抑制效果,评价二者联合对小鼠抗肿瘤免疫活性的影响。方法:(1)通过薄膜水化法和机械震荡法制备生物素化的脂质微泡,光学显微镜下血球计数板计数其浓度,粒度仪测量粒径,扫描电镜下观察脂质微泡形态;利用生物素-亲和素系统将制备的脂质微泡与抗PD-L1单克隆抗体连接,得到携PD-L1抗体的靶向脂质微泡;通过荧光标记,在激光扫描共聚焦荧光显微镜下观察微泡与抗体连接情况;细胞水平及体内显影实验检测抗PD-L1靶向微泡的靶向聚集性。(2)建立小鼠U14宫颈癌皮下移植瘤模型,随机分为5组:对照组(Control),空微泡组(Empty-MBs),抗PD-L1靶向微泡组(PD-L1-MBs),顺铂组(CDDP),抗PD-L1靶向微泡联合顺铂组(PD-L1-MBs/CCDP),根据分组给予不同处理,并于治疗前测量瘤体长径短径,计算肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线。治疗5次后处死部分小鼠,剥离瘤体,计算肿瘤体积及质量抑瘤率。剩余小鼠继续治疗,依据分组分离脾淋巴细胞。(3)将剥离的肿瘤组织进行进一步的抗肿瘤活性分析:通过实时荧光定量PCR(RT-q PCR)及免疫组织化学法检测肿瘤组织中bcl-2、bax的基因及蛋白表达水平;TUNEL检测肿瘤组织中细胞凋亡情况。(4)抗肿瘤免疫活性分析:以分离的小鼠脾淋巴细胞作为效应细胞,U14宫颈癌细胞为靶细胞,共培养后,通过乳酸脱氢酶释放法测定小鼠脾淋巴细胞对U14宫颈癌细胞的体外杀伤活性;流式细胞术(FCM)检测各组脾淋巴细胞体外增殖情况;RT-q PCR检测肿瘤组织PD-L1、TNF-α、IFN-γ、CD80和CD86的基因表达水平;免疫荧光检测肿瘤组织PD-L1蛋白表达水平及CD8+T细胞浸润程度。结果:(1)制备的脂质微泡外观为乳白色悬液,光镜及扫描电镜下呈球形,分散均匀,平均粒径为(1.01±0.14)μm,平均浓度为6.4×10~9个/ml;荧光显微镜下观察可见PD-L1抗体成功连接到脂质微泡表面,并对高表达PD-L1的Hela宫颈癌细胞有较好的靶向聚集性,在荷瘤小鼠体内有良好的靶向显影性。(2)超声介导抗PD-L1靶向微泡联合顺铂作用于U14宫颈癌移植瘤,结果显示PD-L1-MBs组、CDDP组、PD-L1-MBs/CDDP组肿瘤生长较对照组缓慢,体积和质量生长均受抑制,其中PD-L1-MBs/CDDP组抑制作用更明显(P<0.01),体积抑瘤率为69.18%,质量抑瘤率为68.80%。(3)各小组抗肿瘤活性分析结果显示:PD-L1-MBs/CDDP组相对于对照组bcl-2表达降低,bax表达增高(P<0.01);TUNEL结果显示与对照组相比,PD-L1-MBs/CDDP组肿瘤组织中凋亡细胞数量最明显(P<0.01)。(4)各小组抗肿瘤免疫活性分析结果显示:与对照组相比,PD-L1-MBs组及PD-L1-MBs/CDDP组的小鼠脾淋巴细胞对U14宫颈癌细胞体外杀伤百分率均提高了约3倍;且这两组的分离的脾淋巴细胞体外增殖及肿瘤组织中CD8+T细胞浸润明显高于其他各组(P<0.05),相关免疫因子(TNF-α、IFN-γ、CD80和CD86)的基因表达也较其余各组上调(P<0.05);CDDP组PD-L1基因及蛋白表达均高于其他各组(P<0.05)。结论:成功制备携PD-L1抗体的靶向超声脂质微泡,基本特性满足实验要求,体内外具有一定靶向聚集性,可通过改善宫颈癌移植瘤肿瘤免疫微环境,来协同顺铂抗肿瘤治疗的效果,为宫颈癌治疗方法提供了新思路、新方法。