论文部分内容阅读
目的：评价婴儿双歧杆菌介导单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）/丙氧鸟苷（GCV）自杀基因治疗系统对裸鼠肾癌的疗效，初步探讨其诱导肾癌组织细胞凋亡及对肾癌组织p-Stat3、Bcl-xL及Bax表达的影响。方法：1.采用肾癌786-O细胞悬液皮下注射法建立裸鼠肾癌模型，将模型裸鼠随机分为4组，分别经尾静脉注射生理盐水（生理盐水组）、婴儿双歧杆菌（婴儿双歧杆菌组）、携带空质粒pGEX-5X-1的婴儿双歧杆菌（空质粒组）、携带重组质粒pGEX-TK的婴儿双歧杆菌（重组质粒组），再联合腹腔注射GCV。2.治疗4周结束后，称取各组裸鼠质量及荷瘤质量。3. TUNEL染色法检测各组肾癌组织细胞凋亡情况。4.免疫组化染色法检测各组肾癌组织p-Stat3、Bcl-xL及Bax蛋白表达情况。5.实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测各组肾癌组织Stat3、Bcl-xL及Bax mRNA表达水平。6.蛋白质印记法（Western blot）检测各组肾癌组织p-Stat3、Bcl-xL本课题由重庆市卫生局医学科学技术研究重点项目（2011-1-012）资助及Bax蛋白表达水平。结果：1.治疗后，重组质粒组较空质粒组、婴儿双歧杆菌组和生理盐水组裸鼠质量增加（P<0.05），荷瘤质量降低（P<0.05）。2. TUNEL染色结果显示重组质粒组凋亡指数明显高于空质粒组、婴儿双歧杆菌组和生理盐水组（P<0.01）。3.免疫组化染色结果显示重组质粒组肾癌组织p-Stat3、Bcl-xL蛋白表达明显低于空质粒组、婴儿双歧杆菌组和生理盐水组（P<0.01）。而重组质粒组肾癌组织Bax蛋白表达则明显高于空质粒组、婴儿双歧杆菌组和生理盐水组（P<0.01）。4.重组质粒组肾癌组织Stat3、Bcl-xL mRNA及p-Stat3、Bcl-xL蛋白表达水平较空质粒组、婴儿双歧杆菌组和生理盐水组明显下调（P<0.01）。而重组质粒组肾癌组织Bax mRNA及蛋白表达水平则较空质粒组、婴儿双歧杆菌组和生理盐水组明显上调（P<0.01）。结论：婴儿双歧杆菌介导HSV-TK/GCV自杀基因治疗系统明显抑制裸鼠肾癌生长，可能通过抑制Stat3活化进而阻断Stat3信号转导通路，下调其下游抗凋亡蛋白Bcl-xL表达的同时上调促凋亡蛋白Bax的表达来诱导裸鼠肾癌组织细胞凋亡，发挥抑瘤作用。