目的本研究通过建立双环己酮草酰二腙(CPZ)介导的小鼠急性脱髓鞘模型,观察脱髓鞘后小鼠认知功能及海马中Nkx2.2的改变。通过基因沉默Nkx2.2,研究Nkx2.2对CPZ介导小鼠海马急性脱髓鞘后髓鞘再生及认知功能的影响。方法实验一:CPZ建立小鼠急性脱髓鞘模型。将6周龄健康ICR雄性小鼠随机分为两组:CPZ组和对照组。CPZ组小鼠用掺入0.2%CPZ的混合饲料喂养,对照组小鼠普通饲料喂养,均喂养6 w。Morris水迷宫(MWM)、悬尾实验(TST)检测小鼠认知功能的改变。Western blot检测小鼠海马中MBP、Nkx2.2、NG2的蛋白表达。免疫组织化学检测小鼠海马中Nkx2.2、NG2的表达。实验二:将6周龄健康ICR雄性小鼠随机分称为四组:(1)CPZ+腺相关病毒干扰组(CPZ+Nkx2.2-shRNA);(2)CPZ+腺相关病毒空载体组(CPZ+AAV-GP);(3)CPZ+生理盐水组(CPZ+NS);(4)对照组+生理盐水组(Control+NS)。CPZ+腺相关病毒干扰组、CPZ+腺相关病毒空载体组、CPZ+生理盐水组小鼠用混有0.2%CPZ的混合饲料喂养,对照组+生理盐水组小鼠普通饲料喂养,均喂养6 w。通过小鼠脑立体定位技术将腺相关病毒注射到CPZ+腺相关病毒干扰组小鼠的海马区,腺相关病毒空载体注射到CPZ+腺相关病毒空载体组小鼠的海马区,生理盐水注射到CPZ+生理盐水组及对照组+生理盐水组小鼠的海马区。缝合伤口后,四组小鼠普通饲料再继续喂养2 w。MWM、TST检测小鼠认知功能的改变。Western blot及免疫组织化学检测小鼠海马中Nkx2.2、PLP、NG2、CNPase、CC-1的表达。结果实验一:建立小鼠急性脱髓鞘模型后,与对照组相比,CPZ组小鼠逃避潜伏期时间增加,穿越平台次数减少,悬尾不动时间增加(P<0.05)。Western blot结果显示:与对照组相比,CPZ组小鼠海马中MBP的蛋白表达下降(P<0.001),Nkx2.2、NG2的蛋白表达升高(P<0.05)。免疫组织化学结果显示:CPZ组小鼠海马中Nkx2.2、NG2的表达高于对照组(P<0.05)。实验二:,CPZ+腺相关病毒干扰组小鼠与CPZ+生理盐水组相比逃避潜伏期时间减少,穿越平台次数增加,悬尾不动时间减少(P<0.05)。CPZ+生理盐水组小鼠与对照组+生理盐水组相比,逃避潜伏期时间增加,穿越平台次数减少,悬尾不动时间增加(P<0.05)。Western blot结果显示:CPZ+腺相关病毒干扰组小鼠与CPZ+生理盐水组相比海马中Nkx2.2的蛋白表达下降(P<0.001),PLP、NG2、CNPase的蛋白表达上升(P<0.05)。CPZ+生理盐水组小鼠与对照组+生理盐水组相比海马中PLP、CNPase的蛋白表达下降(P<0.05),NG2、Nkx2.2的蛋白表达无统计学差异(P>0.05)。免疫组织化学结果显示:CPZ+腺相关病毒干扰组小鼠与CPZ+生理盐水组相比海马中Nkx2.2的表达降低(P<0.05),PLP、NG2、CC-1的表达增加(P<0.05)。CPZ+生理盐水组小鼠与对照组+生理盐水组相比海马中PLP的表达下降(P<0.001),Nkx2.2、NG2、CC-1的表达没有统计学差异(P>0.05)。结论1.急性脱髓鞘可以引起小鼠认知功能障碍,促进小鼠海马中Nkx2.2的表达增加。2.基因沉默Nkx2.2可以改善急性脱髓鞘后小鼠认知功能障碍并促进小鼠海马脱髓鞘后髓鞘的再生。3.Nkx2.2对髓鞘再生及认知功能具有调控作用。