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鸡白痢沙门氏菌（Salmonella pullorum，S. pullorum）是危害养鸡业最严重的肠道细菌之一，尤其对雏鸡的危害最为严重。禽β-防御素6（AvBD6）高表达于消化道，并具有广泛的抗微生物活性。鸡Toll样受体（ChTLR15）可以识别沙门氏菌,诱导机体自身免疫，且ChTLR15同任何已知脊椎动物的TLR都不同，是鸡所特有的受体。 本研究开展在抗鸡白痢沙门氏菌感染过程中AvBD6和ChTLR15的天然免疫调控机制方面的研究。本试验用鸡白痢沙门氏菌感染14日龄的雏鸡，建立鸡白痢沙门氏菌感染模型，观察其病理变化。采集雏鸡感染后不同时间点的小肠组织，利用实时荧光定量RT-PCR检测AvBD6和ChTLR15在小肠组织内mRNA的转录水平，原位杂交方法结合激光共聚焦显微镜来检测AvBD6和ChTLR15mRNA在小肠组织内的分布规律，具体研究内容和结果如下： 1、罗曼雏鸡感染鸡白痢沙门氏菌及病理变化 经口接种配制好的浓度为1×109 CFU/mL鸡白痢沙门氏菌菌液0.5 mL/只，对照组接种0.5 mL/只 PBS，感染后观察雏鸡的病理变化。结果显示，鸡白痢沙门氏菌可以引起罗曼雏鸡的脾脏，肝脏，心脏和肠道等出现明显的病理组织学变化。肝脏肿大且肝脏表面有白色坏死点，心脏上有白色结节，小肠、直肠有出血点。小肠绒毛受损甚至脱落,肠绒毛中心轴出现较多的红细胞，炎性细胞增多，柱状上皮细胞脱落。 2、AvBD6和ChTLR15在感染雏鸡小肠组织中的mRNA转录水平 14日龄的罗曼雏鸡接种鸡白痢沙门氏菌，于感染48 h内（0 h，6 h，12 h，24 h，36和48h）分别采集十二指肠、空肠和回肠组织，应用实时荧光定量PCR检测AvBD6和ChTLR15基因在感染过程中的表达。结果显示雏鸡感染鸡白痢沙门氏菌后，AvBD6和ChTLR15在各肠段组织中均有表达，其中在十二指肠相对表达量最高，在0 h-24 h内呈上升趋势，24 h-48 h相对表达量呈下降趋势，在24 h的表达量极显著高于0 h(P<0.01)，且AvBD6在24 h的表达量显著高于12 h(P<0.05)。在同一时间段AvBD6和ChTLR15mRNA在十二指肠的转录水平显著高于回肠(P<0.05)，与空肠相比，差异不显著(P>0.05)，且回肠和空肠相比差异不显著(P>0.05)。但在相同条件下，AvBD6和ChTLR15mRNA的转录水平差异不显著(P>0.05)。 3、AvBD6和ChTLR15基因在感染雏鸡小肠组织中的原位表达 根据荧光定量PCR的结果，于感染24h时采集十二指肠、空肠和回肠组织，利用原位杂交技术来检测雏鸡在感染鸡白痢沙门氏菌24h时AvBD6和ChTLR15在肠道中的原位表达情况。结果显示，AvBD6和ChTLR15 mRNA在小肠内均有不同程度的分布，且在感染鸡白痢沙门氏菌24h时AvBD6和ChTLR15 mRNA的转录水平显著高于0h(P<0.05)，其主要分布在肠绒毛的中心轴，在十二指肠中荧光信号最强。 上述试验表明，雏鸡感染鸡白痢沙门氏菌后，AvBD6和ChTLR15mRNA在雏鸡小肠中的分布和表达具有一定的规律性，且AvBD6和ChTLR15mRNA在十二指肠和空肠的表达水平呈正相关性，说明AvBD6起到了抗鸡白痢沙门菌感染的作用，而这种作用有可能与TLR15介导的信号转导有关。