【摘 要】
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目的乳腺癌耐药蛋白(Breast cancer resistance potion,BCRP)和泛素化E3链接酶Bre1A与恶性肿瘤的发生发展密切相关,但它们调控喉癌的发生发展的机制尚不十分明确。本研究通过
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目的乳腺癌耐药蛋白(Breast cancer resistance potion,BCRP)和泛素化E3链接酶Bre1A与恶性肿瘤的发生发展密切相关,但它们调控喉癌的发生发展的机制尚不十分明确。本研究通过检测BCRP与Bre1A对喉癌细胞(Hep-2)增殖与迁移的影响,来探讨两者在喉癌的发生发展中所起的功能及作用。为未来临床诊断、治疗提供有价值的理论依据。方法本实验采用PCR技术从乳腺文库中扩增出人乳腺癌耐药基因BCRP和泛素化E3连接酶Bre1A,并将其正确插入到Myc和2B-Flag载体中;将空载体与重组质粒分别转染293T细胞到后,应用Western blot检测表达情况,应用生长曲线实验和细胞划痕实验检测BCRP及Bre1A对喉癌细胞(Hep-2)增殖的影响。结果分别成功构建人BCRP大小约为1835bp和人Bre1A大小约为2927bp的重组质粒,将PCR产物成功插入Myc和2B-Flag标签通过测序证明Myc-BCRP、2B-Flag-Bre1A构建成功,并且应用Western blot检测Myc-BCRP、2B-Flag-Bre1A融合蛋白的表达,显示在293T细胞转染重组质粒Myc-BCRP和2B-Flag-Bre1A后,前者在相对分子量约73KD处可见明显特异性条带,后者在相对分子量约120KD处可见明显特异性条带,表明重组质粒Myc-BCRP和2B-Flag-Bre1A能在细胞中正确表达。应用生长曲线实验检测BCRP及Bre1A表达对喉癌细胞(Hep-2)增殖的影响,结果表明BCRP能够促进喉癌细胞的增殖,Bre1A能够抑制喉癌细胞的增殖。再应用细胞划痕实验检测BCRP和Bre1A对喉癌细胞迁移的影响,过表达BCRP能够促进喉癌细胞迁移,过表达Bre1A能够抑制喉癌细胞迁移。结论BCRP促进喉癌细胞的增殖与迁移,Bre1A抑制喉癌细胞的增殖与迁移。这一研究结果对于BCRP和Bre1A对喉癌产生发展有了进一步的探索,为后续研究喉癌的发生发展机制提供新的理论依据。
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