LncRNA H19抑制let-7表达促进食管鳞癌上皮间质转化的机制研究

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目的:探索食管鳞癌中长链非编码RNA H19(Long Non-coding RNA H19,LncRNA H19,H19)与microRNA let-7的相互作用和对上皮间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)的影响,揭示H19在食管鳞癌侵袭、转移中的作用。方法:组织水平:运用实时荧光定量PCR(Quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测48对食管鳞癌组织和癌旁组织中H19和let-7的相对表达,分析H19的表达与let-7表达以及临床病理特征的相关性。细胞水平:运用qRT-PCR检测H19和let-7的本底表达,运用RNA干扰技术,在H19高表达的KYSE30和Eca109两个食管鳞癌细胞系用脂质体2000(LipofectamineTM2000,Lipo)转染H19小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA),运用qRT-PCR检测转染后H19和let-7的表达,运用Western blot检测EMT相关分子的表达。运用MTT法检测H19对细胞增殖的影响,流式细胞术检测H19对细胞早期凋亡率的影响,细胞划痕实验和Transwell实验检测H19对细胞迁移和侵袭的影响。结果:组织水平:H19在食管鳞癌组织相对表达(1.90±1.94)高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05),H19高表达食管鳞癌组织中低表达let-7(P<0.05),H19表达和食管鳞癌组织浸润深度呈正相关(P<0.05),并且H19高表达患者预后差(P<0.05)。细胞水平:在KYSE30和Eca109细胞系成功敲低H19表达(P<0.05),let-7表达显著升高(P<0.05),以KYSE30细胞系升高最显著(4.65±0.21);Western blot显示E-cadherin(2.07±0.17)表达升高,Vimentin(0.04±0.01)、β-catenin(0.51±0.04,0.56±0.10)、Slug(0.36±0.08,0.37±0.06)表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞功能实验显示:下调H19表达,细胞增殖受到抑制(P<0.05)、早期凋亡率增加(P<0.05)、细胞迁移(P<0.05)和侵袭受到抑制(P<0.05)。结论:LncRNA H19通过抑制let-7表达促进食管鳞癌上皮间质转化激活癌细胞恶性增殖和浸润转移,LncRNA H19在食管鳞癌表达可作为预测预后的生物标记之一。
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