子宫颈上皮内瘤变组织中HPV L1壳蛋白与树突状细胞和Ki-67表达的相关性

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背景和目的:  宫颈癌是由宫颈上皮发生的常见恶性肿瘤,发病率仅次于乳腺癌而位居女性恶性肿瘤的第二位。全世界每年新发宫颈癌50余万例,我国每年的宫颈癌新发病人占全球新发病例的28.8%,严重危害广大妇女的健康。近年来,随着国家对宫颈癌的防治与筛查工作的开展,宫颈癌的死亡率与发病率有所降低,但是却出现了患者明显年轻化的趋势。因此,宫颈癌仍然是严重威胁我国妇女健康的重要疾病之一。  由宫颈鳞状上皮发生的宫颈鳞癌是宫颈癌的最常见类型,占宫颈癌的90%以上。宫颈鳞癌的发生一般呈现为多阶段、渐进性发展的演进模式。作为癌前病变的宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)与宫颈鳞癌的发生有着密切的关系,及时发现宫颈癌的癌前病变并实施早诊早治,对于宫颈癌的防治具有重要的意义。  现已明确,人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染与宫颈癌的发生有着密切关系。HPV L1编码的HPVL1壳蛋白是HPV的主要衣壳蛋白,在HPV感染的早期复制阶段,HPV L1壳蛋白即呈阳性表达,而在感染后期当HPVDNA整合到宿主细胞的DNA后,HPV L1壳蛋白则呈阴性反应。因此,HPV L1壳蛋白是反映宫颈病变程度及预测宫颈病变发展进程的重要生物学标志。在机体感染HPV后,多数感染者因免疫功能较好可主动清除HPV而自愈,只有少数妇女在感染HPV后伴免疫功能低下时,才有可能导致宫颈病变的进展,甚至诱发宫颈癌的发生。  为探讨HPV感染后CIN组织中HPV L1壳蛋白检测与Ki-67表达和机体免疫递呈的相关性及其意义,本研究采用赛泰试剂盒检测和免疫组化技术,对CIN组织中的HPV L1壳蛋白、Ki-67和S-100阳性树突状细胞进行检测,并比较它们的相关性及意义。有关联合检测HPV L1、Ki-67和树突状细胞在CIN组织中表达及其意义的研究,迄今国内外尚未见相关报道。  材料与方法:  1、材料:  收集2011年12月至2012年10月郑州大学第一附属医院病理科存档的宫颈病变组织蜡块96例,全部病例均经临床确诊有HPV感染。患者年龄27~66岁,中位年龄37±12岁。其中CINI级40例,CINⅡ级24例,CINⅢ级22例,宫颈浸润性鳞癌10例。86例CIN病例均为宫颈活检组织,10例宫颈浸润癌均为手术切除样品。标本均使用10%中性缓冲福尔马林液固定,常规石蜡包埋,连续切取4~5μm石蜡切片备用。  2、方法:  1.采用美国爱迪旺斯医疗科技有限责任公司研制的赛泰试剂盒,对96例样品中HPV L1壳蛋白的表达进行检测,比较各病变组HPV L1壳蛋白的表达差异。  2.以免疫组织化学SP方法,检测CIN各病变组织中S-100阳性树突状细胞和Ki-67的表达。  3.通过统计学分析,探讨HPV L1壳蛋白与树突状细胞及Ki-67表达的相关性及其意义。  3、统计学分析:  使用SPSS13.0统计软件处理实验数据。计数数据采用x2检验及秩和检验;计量数据采用均数±标准差;采用t检验比较两组样本的均数,两组以上样本均数的比较用方差分析。以α=0.05为显著性检验水准。  结果:  1.HPV L1阳性信号呈红褐色,定位于细胞核,阳性细胞主要分布于鳞状上皮的表层及中层,呈弥漫分布或灶状分布。在86例CIN组织中32例呈阳性表达,其阳性率为37.2%(32/86)。在CINⅠ级、CINⅡ级和CINⅢ级病变组织中,HPVL1壳蛋白的阳性表达率分别为50.0%(20/40),41.7%(10/24),9.1%(2/22),而鳞癌组织中为阴性表达,阳性率为0.0%(0/10)。统计学分析表明,CINⅠ级和Ⅱ级的阳性率与Ⅲ级相比,其差异具有统计学意义(P<0.05),而CINⅠ级与CINⅡ级相比差异无统计学意义(P>0.05)。  2.Ki-67阳性信号呈棕黄色细颗粒状,定位于细胞核。在86例CIN病变组织中,40例呈Ki-67阳性表达,其阳性率为46.5%(40/86)。在CINⅠ级、CINⅡ级和CINⅢ级病变组织中,各级CIN的Ki-67阳性表达率分别为:25.0%,(10/40),33.3%(8/24),100%(22/22)。结果表明,随着CIN上皮增生程度的加重,其Ki-67阳性表达率逐渐增高。CINⅠ级和Ⅱ级的Ki-67阳性表达率与CINⅢ级相比,差异具有统计学意义(P<0.05),而CINⅠ级与CINⅡ级间无统计学差异(P>0.05)。  3.S-100阳性树突状细胞的阳性信号呈棕黄色细颗粒状,定位于细胞质,细胞核亦有阳性着色。在86例CIN病变组织中,36例呈阳性表达,其阳性表达率为41.9%(36/86)。在CINⅠ级、Ⅱ级和Ⅲ级病变组织中,其阳性率分别为:55.0%,(22/40),41.7%(10/24)和18.2%(4/22),结果表明:随着CIN病变的发展演进,其S-100阳性树突状细胞的阳性表达率依次降低。统计学分析表明,CINⅠ级、Ⅱ级树突状细胞阳性表达率与CINⅢ级相比,差异具有统计学意义(P<0.05),而CINⅠ级与CINⅡ级间无统计学差异(P>0.05)。  4.经统计学分析证实,CIN组织的HPVL1壳蛋白检测与Ki-67表达呈负相关关系(r=-0.332,P<0.05),而与S-100阳性树突状细胞的表达呈正相关关系(r=0.615,P<0.05)。  结论:  1.随着CIN病变的发展演进,HPV L1壳蛋白的表达率依次降低,HPVL1壳蛋白检测在预测CIN病变的发展及预后判断方面具有较大的应用价值。  2.随着CIN病变的逐渐加重,Ki-67表达依次升高,HPVL1壳蛋白检测与Ki-67表达呈负相关关系。  3.随着CIN病变级别的增加,树突状细胞的表达率依次降低。HPVL1壳蛋白与S-100阳性树突状细胞的表达呈正相关关系,提示机体的免疫功能可能与HPV诱发宫颈病变的预后有关。
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