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目的:通过对DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)基因进行检测,分析其在成人急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者中的突变率、突变位点、临床特征等,对比DNMT3A突变型与野生型的总生存(Overall Survival,OS)、无复发生存(Relapse-Free Survival,RFS),判断DNMT3A基因突变对AML预后的影响。利用RT-PCR技术测定初诊AML患者WT1基因(Wilm’s Tumor 1 gene)表达量,比较DNMT3A突变型与野生型的WT1表达水平差异,利用WT1这一独立预后因素来反应DNMT3A突变组的预后情况。借此为以后预后判断分级系统的逐步完善及靶向治疗提出指导意义。方法:1、抽取AML患者骨髓标本2-3ml,EDTA抗凝处理,利用流式细胞术及遗传学分型AML,提取基因组DNA,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)方法扩增DNMT3A第23号外显子基因片段,将PCR产物纯化后行基因测序。2、利用Taqman探针荧光定量PCR方法检测WT1基因的表达水平,以ABL作为内参基因,用WT1拷贝数/ABL拷贝数计算相对表达量。结果:在132例初诊成人AML患者中,男性72例,中位年龄51.5岁(18-80岁),女性60例,中位年龄52岁(21-80岁),其中M0型5例,M1型6例,M2型48例,M3型28例,M4型22例,M5型18例,M6型3例,M7型2例,共检测出DNMT3A突变型14例,突变比例约为10.6%,其中M2型6例(12.5%),M4型4例(18.2%),M5型4例(22.2%)。在所有突变类型中,5例为R882H,全部为M2型;4例为R882C,分别为M2型1例及M4型3例;5例为R882P,分别为M4型1例及M5型4例。R882S等其他类型未检出。在所有病例里面,核型正常染色体患者为58例,占比为43.6%,在这58例患者中,发生DNMT3A基因突变患者有11例,比例占到19.0%,而在74例染色体异常患者中发生DNMT3A突变的数量只有3例,比例仅为4.1%。DNMT3A突变组中有3例患者存在染色体异常,其余11例均为核型正常染色体患者,其比例占到78.6%。DNMT3A野生型患者年龄58.0±18.8岁,外周血白细胞中位数37.9(0.75-332.13)×10~9/L,血红蛋白中位数65(22-110)g/L,血小板中位数27(4-208)×10~9/L,外周血原始细胞中位数45.5%(0.0-93.0%),骨髓原始细胞中位数74.8%(20.0%-95.0%);DNMT3A突变型患者年龄52.9±16.7岁,外周血白细胞中位数13.3(0.54-322.0)×10~9/L,血红蛋白中位数66(36-110)g/L,血小板中位数43(15-103)×10~9/L,外周血原始细胞中位数76.5%(0.0-97.0%),骨髓原始细胞中位数75.3%(20.0%-95.0%),两组各类型数据对比不存在明显统计学差异,P值均大于0.05。突变组WT1相对表达量中位数为3.77(0.008-110.5),野生组为1.89(0.005-76.1),P值<0.05,存在显著性差异,即DNMT3A突变组中WT1的相对表达量要高于野生组。突变组中3年OS(21.4%vs 65.3%)及RFS(14.3%vs58.5%)均要短于野生组,存在统计学差异(P<0.05)。结论:1、本次研究中,DNMT3A基因突变在初诊成人AML患者中的比例约为10.6%,热点突变位点为R882。2、DNMT3A突变组AML患者在年龄、外周血白细胞、血红蛋白、血小板、外周原始细胞、骨髓原始细胞比例对比野生组无明显统计学差异。3、DNMT3A基因突变多发生于正常核型AML患者,比例约为19.0%。在DNMT3A突变组中,大部分患者为正常核型,其比例占到78.6%。4、DNMT3A突变组中WT1的相对表达量要高于野生组,存在统计学差异,反应DNMT3A突变组预后差于野生组,同时表明可能在分子层面两者存在调控的相关性,协同影响AML的发生。5、DNMT3A突变组患者的OS、RFS要明显短于野生组,提示突变组预后较差。