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中药是中华民族的瑰宝,也是国家的优势和特色。中药拥有几千年的民族传统,流传至今,长盛不衰。众所周知,对于西药来说,中药组成复杂,很难从有效的中药中确定其有效成分。当中药和化药合用时,可能引发药物相互作用(Drug-drug interactions, DDIs).1998年6月欧洲医药评价署/专利药品委员会(EMEA/CPMP)颁布的《药物相互作用研究指导原则》,定义药物相互作用为“由于合并用药、饮食因素或社会习惯等引起了药物动力学／药效学改变”。现在,国内研究药物之间的合用主要是基于药理作用的相加或相减,而对于药物在代谢层面产生相互作用的研究较少。临床常见的DDIs主要是在ADME(吸收Absorption、分布Distribution、代谢Metabolism、排泄Excretion)药动学方面的相互作用。其中代谢方面的DDIs约占40%。药物的代谢主要依赖于多种酶系,其中最重要的是CYP450酶。目前CYP450的研究已经列为新药的早期预评及新药临床前药代动力学研究中必须开展的一项工作。借助药动学理论,研究中药配伍理论,是中药现代化的重要组成部分。在临床用药中,中药可能通过改变药物代谢酶活性,对药效产生相加、协同和拮抗的作用。因此研究药物相互作用,可减轻药物的不良反应。所以探讨中药对药物代谢酶活性的影响,具有重要的意义。本学位课题主要基于“鸡尾酒”法的柚皮素对丹参素配伍机制的研究。主要内容如下：1建立、优化LC-MS/MS测定“鸡尾酒”探针药物和代谢产物方法学建立灵敏、快速、稳定的测定大鼠血浆中CYP450探针药物/代谢产物,甲苯磺丁脲/4-羟基甲苯磺丁脲、氯唑沙宗、咖啡因/副黄嘌呤、奥美拉唑/5-羟基奥美拉唑、右美沙芬/右啡烷、咪达唑仑/1’-羟基咪达唑仑的LC-MS/MS方法,并用于其在大鼠体内的药代动力学研究。100μL血浆样品加入内标地西泮及乙酸铵,以乙酸乙酯进行液液萃取,离心取上清挥干复溶,LC-MS/MS检测。选用Agelient Eclipse Plus-C18色谱柱(2.1mm×50mm,3.5μm),乙腈和0.01%甲酸(1mmol·L-1甲酸铵)作为流动相,梯度洗脱,流速为0.3mL·min-1,进样量10μL。采用电喷雾电离源(ESI)。扫描方式为多反应离子检测(MRM),甲苯磺丁脲m/z：269.1/170.0；4-羟基甲苯磺丁脲m/z：285.1/186.0；氯唑沙宗m/z：168.1/132.1；格列齐特m/z：322.1/170.0；咖啡因m/z：181.2/124.0；副黄嘌呤m/z：195.2/138.2；奥美拉唑m/z：346.1/198.1；5-羟基奥美拉唑m/z：362.2/214.2；右美沙芬m/z：272.3/147.1；右啡烷m/z：258.2/157.0；咪达唑仑m/z：326.1/291.2；1’-羟基咪达唑仑m/z：342.1/324.2；地西泮m/z：285.1/154.0。甲苯磺丁脲、4-羟基甲苯磺丁脲、氯唑沙宗咖啡因、副黄嘌呤、奥美拉唑、5-羟基奥美拉唑、右美沙芬、右啡烷、咪达唑仑和1’-羟基咪达唑仑的线性范围分别为0.98-4000、0.25-125、0.98-2000、1.95-2000、0.98-250、0.48-2000、0.98-250、0.98-2000、0.48-125、1.95-2000和1.95-250ng·mL-1。稳定性RSD小于15%且无基质效应。2柚皮素对肝药酶亚型的影响研究结果大鼠分别灌胃给予CMC-Na-saline、15mg·kg-1、30mg·kg-1、60mg·kg-1柚皮素5min后,股静脉注射混合探针药物。应用LC-MS/MS法测定血浆中CYP2C9、CYP2E1、CYP1A2、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的特异性探针药物／代谢产物浓度。使用Winnolin软件计算空白探针药物组和两个柚皮素浓度下,TOL/4OH-TOL、CZX、CAF/PX、 OPZ/5OH-OPZ、DM/DX和MDZ/1’OH-MDZ计算非房室模型药代动力学参数。同时以时间(time)为横坐标,以浓度(ng/mL)为纵坐标,得空白探针药物组、15mg?kg-1、30mg·kg-1、60mg·kg-1柚皮素组的血药浓度-时间曲线。单次灌胃给予15mg·kg-1、30mg·kg-1、60mg·kg-1柚皮素与空白探针药物组比较,15mg·kg-1、30mg·kg-1柚皮素组中MDZ的t1/2显著升高,AUC0-t、AUC0-∞有增加的趋势,而60mg·kg-1柚皮素组中MDZ的AUC0-t、AUC0-∞显著性增加,CL减小。1’OH-MDZ的AUCo-t和AUC0-∞均有减小的趋势。在以上实验结果表明,60mg·kg-1柚皮素组中,MDZ在大鼠体内浓度升高,1’OH-MDZ在大鼠体内浓度下降,出现的原因是CYP3A4被抑制。而在30mg·kg-1柚皮素组中,MDZ/1’OH-MDZ在大鼠体内的浓度也存在这种关系,由此可知柚皮素对CYP3A4具有抑制作用。柚皮素对其它的CYP450酶亚型无影响。3柚皮素对丹参素的吸收动力学影响研究结果丹参素和柚皮素配伍后,丹参素的t1/2减少,提示丹参素的吸收速度增快,AUCo-t和AUC0-∞显著增加,提示有更多量的丹参素吸收入血,提高了丹参素的生物利用度。CL明显减少,说明丹参素在大鼠体内的消除率减慢,延长在体内的停留时间以更好的发挥药理作用。结合以上药代动力学参数分析,柚皮素和丹参素配伍后,柚皮素可显著提高DSS在大鼠体内的停留时间及吸收入血的速率及生物利用度。基于柚皮素对CYP3A4的抑制作用,阐释丹参素和柚皮素配伍使用时,丹参素药代参数改变的原因。