丛生工业用竹SuSy和UGPase基因克隆与生物信息学分析及UGPase基因遗传转化

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竹纤维因其纤维量高,能代替木本纤维,是优良的造纸材料。蔗糖合酶(SuSy)和尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UGPase)是植物纤维素合成中关键酶。本研究采用同源克隆技术克隆了慈竹SuSy基因和UGPase基因以及梁山慈竹的UGPase基因,并对其进行生物信息学分析、组织表达模式分析及遗传转化,为SuSy和UGPase基因在丛生工业用竹遗传改良中的运用奠定基础。主要研究结果如下:  1.从慈竹笋中克隆得到5个SuSy cDNA全长基因、1个UGPase cDNA全长基因,从梁山慈竹中克隆得到1个UGPase cDNA全长基因,分别命名为BeSUS1、BeSUS2、BeSUS3、BeSUS4、BeSUS5、BeUGP和DfUGP,GenBank注册号分别为KJ525746、KJ525747、KJ525748、KJ525749、KJ525750、KJ525751和KJ525752。  2.生物信息学分析结果表明,BeSUS1、BeSUS2、BeSUS3、BeSUS4、BeSUS5、BeUGP和DfUGP基因cDNA全长序列分别为2536bp、2117bp、2536bp、2517bp、2648bp、1503bp和1516bp,其ORF序列长各为2451bp、1839bp、2451bp、2427bp、2451bp、1134bp和1422bp,分别编码氨基酸816、612、816、808、816、377和473个。慈竹SUS基因编码的蛋白均为亲水性,其二级结构中均是α-螺旋>无归卷曲>延伸链>β-转角。慈竹和梁山慈竹UGP基因编码的蛋白也表现为亲水性,其二级结构中均为无归卷曲>α-螺旋>延伸链>β-转角。氨基酸多序列比对结果表明,BeSUS1、BeSUS3和BeSUS5与BoSUS1、BoSUS3及OsSUS1基因亲缘关系较近,BeSUS2和BeSUS4与BoSUS2、BoSUS4及OsSUS2基因亲缘关系较近,5个BeSUS基因编码蛋白均包含两个功能域:Sucrose_synth功能域和Glycos_transf_1功能域。BeUGP与BoUGP1基因亲缘关系最近,而DfUGP与巨龙竹UGP基因亲缘关系最近,BeUGP和DfUGP基因编码蛋白均包含UDPGP功能域。  3.慈竹SUS基因和UGP基因的real-time PCR分析结果表明,慈竹SUS基因和UGP基因在慈竹各组织部位都表达,其中BeSUS1主要在茎中表达,BeSUS2、BeSUS4和BeSUS5主要在茎下表达,BeSUS3主要在茎上表达,BeUGP主要在未展开叶和茎下表达。  4.构建了BeSUS3和DfUGP的植物过表达载体pCAMBIA 1303-BeSUS3和pCAMBIA 1303-DfUGP,并将pCAMBIA 1303-DfUGP载体成功转化烟草,得到两株转基因苗。当代转基因植株的初步分析结果表明,与CK相比,转基因株的光合能力更强,开花提早。
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