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研究背景：过氧化物酶体增殖物激活型受体δ(peroxisome Proliferator- activated receptorδ, PPARδ)是过氧化物酶体增殖物激活型受体家族中的一员,广泛表达于多种器官和组织,主要控制脂肪组织和肌肉中脂肪酸氧化和能量解偶联,抑制巨噬细胞诱导的炎症,改善动脉粥样硬化,并参与许多疾病的发生和发展过程。PPARδ的配体分为天然配体和合成配体。GW501516是PPARδ的合成配体,属于苯氧乙酸衍生物,PPARδ与GW501516结合后,活化的PPARδ与9-顺视黄酸类受体(9-cisretinoid X receptor, RXR)形成异二聚体,然后识别并于靶基因启动子上游的过氧化物酶体增殖物反应元件(peroxisome proliferator response element, PPRE)结合,调节靶基因下游的基因转录、翻译及生物学效应。本课题观察oxLDL对THP-1源性巨噬细胞PPARδ表达的影响。同时以PPARδ激动剂GW501516来探讨PPARδ对巨噬细胞增殖、凋亡的影响及在巨噬细胞荷脂过程的作用。第一部分oxLDL对THP-1源性巨噬细胞PPARδ表达的影响目的：观察oxLDL对THP-1源性巨噬细胞PPAR 8表达的影响。方法：1.用不同浓度(0mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L)的oxLDL与THP-1源性巨噬细胞共孵育24小时；用RT-PCR及Western blotting检测细胞PPARδmRNA和蛋白的表达。2.50mg/L oxLDL与THP-1源性巨噬细胞共孵育0h、12h、24h、48h等不同时间,用RT-PCR及Western blotting检测细胞PPAR 8 mRNA和蛋白的表达。结果：不同浓度oxLDL可诱导THP-1源性巨噬细胞PPAR 8的表达。随着oxLDL浓度的增加,细胞PPAR8的mRNA水平及蛋白表达逐渐增加,差别有显著性,且在浓度为50mg/L时PPAR 8 mRNA的表达达峰值(P<0.05)。而时效试验结果显示50mg/L oxLDL与THP-1源性巨噬细胞孵育孵育24h时,PPARδmRNA水平及蛋白表达增加明显,且差别有统计学意义(P<0.05)。而在孵育48h后,表达较24h时有所减少,但与24h相比差别无统计学意义。结论：oxLDL可上调THP-1源性巨噬细胞PPARδ的表达第二部分PPARδ对THP-1源性巨噬细胞增殖、凋亡的影响目的：通过PPARδ激动剂GW501516活化PPARδ来观察PPARδ在oxLDL诱导THP-1源性巨噬细胞增殖、凋亡中的作用。方法：THP-1单核细胞经PMA诱导分化成为巨噬细胞后,以50mg/L oxLDL孵育THP-1源性巨噬细胞24h为阳性对照组,50mg/L oxLDL与不同浓度的PPARδ激动剂GW501516 (1、10、100nmol及1μmol)共同孵育THP-1源性巨噬细胞24h,MTT法检测THP-1源性巨噬细胞增殖活性,Hoechst33258染色、Annexin V/PI双染后细胞流式仪检测空白组、oxLDL组及1μmol GW501516组细胞凋亡情况,分光光度法测定细胞内caspase 3活性变化。结果：PPARδ激动剂GW501516可阻抑oxLDL对THP-1源性巨噬细胞增殖的抑制作用,且能减少oxLDL诱导THP-1源性巨噬细胞的凋亡。MTT及Hoechst33258染色结果显示在GW501516浓度达100nmol时作用显著,且1μmol浓度时作用更明显(P<0.05)。流式分析结果也同样表明1μmol GW501516能显著抑制oxLDL诱导THP-1源性巨噬细胞的凋亡(P<0.05)。分光光度法检测细胞内Caspase 3活性显示GW501516能呈浓度依赖性下调caspase 3的活性(P<0.05)结论：PPARδ激动剂GW501516可下调caspase 3活性,抑制oxLDL诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡。第三部分PPARδ对THP-1源性巨噬细胞脂质蓄积的影响目的：通过PPARδ激动剂GW501516活化PPARδ来观察PPARδ对THP-1源性巨噬细胞脂质蓄积的影响的影响。方法：THP-1单核细胞经PMA诱导分化成为巨噬细胞后,以50mg/L oxLDL孵育THP-1源性巨噬细胞24h为阳性对照组,50mg/L oxLDL与不同浓度的PPARδ激动剂GW501516 (1、10、100nmol及1μmol)共同孵育THP-1源性巨噬细胞24h,油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况,高效液相色谱检测细胞内总胆固醇、和胆固醇酯含量。结果：PPARδ激动剂GW501516可增加THP-1源性巨噬细胞内脂质蓄积,油红0染色显示100nmol GW501516处理后可见细胞内脂滴颗粒体积明显增大且脂滴数增多,当GW501516浓度达1μmol时作用更为明显(P<0.05)。高效液相色谱检测结果显示阳性对照组总胆固醇含量为483.10±12.70,胆固醇酯/总胆固醇(%)为49.60%。1、10、100nmol和1μmolGW501516处理组总胆固醇含量分别为501.53±15.73,497.69±14.25,647.42±18.62和696.55±20.35；胆固醇酯/总胆固醇(%)分别为56.7%,53.90%,64.48%和66.26%,100nmol和1μmol GW501516组与阳性对照组比较差别有显著性(P<0.05)。结论：PPARδ激动剂GW501516可增加THP-1源性巨噬细胞内脂质蓄积。总结：(1) oxLDL可上调THP-1源性巨噬细胞PPARδ的表达。(2) PPARδ激动剂GW501516可下调caspase 3活性,抑制oxLDL诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡。(3) PPARδ激动剂GW501516可增加THP-1源性巨噬细胞内脂质蓄积。