喹乙醇诱导胰岛细胞DNA损伤及其机制探讨

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目的:喹乙醇(olaquindox),是一种抗菌促生长剂,被广泛应用在禽畜和水产养殖业,已有实验表明喹乙醇对肝肾均有损害,但尚未有关于喹乙醇对胰岛损害的研究,本实验通过彗星实验观察喹乙醇是否会对大鼠胰岛细胞的DNA有损伤并探讨其损害可能的机制,通过western blot实验观察喹乙醇对p53蛋白表达的影响,从而探讨由持续DNA损伤可能引起的与癌有关基因表达的增加,为更全面的评估喹乙醇多脏器的损害提供依据。方法:喹乙醇引起的DNA损伤是通过单细胞凝胶电泳实验检测,用2,7,-二氢二氯荧光素(DCFH)检测细胞内活性氧(ROS)含量,用吖啶橙(AO)检测细胞内溶酶体膜稳定性,通过辣根过氧化物酶标记的荧光指示剂来检测westernblot实验中P53蛋白表达量,通过碱性保护剂NH4Cl和NAC来干预彗星实验及分别干预溶酶体实验和ROS实验。结果:喹乙醇(0~1600ug/ml)作用于INS-1细胞1h后,彗星实验中尾长、尾距、尾DNA%含量均增加,并呈剂量依赖,在对800、1600ug/ml剂量组分别加NH4Cl和NAC干预后均有保护作用。喹乙醇同样作用于INS-1细胞1h,可使细胞内溶酶体膜稳定性下降、ROS含量增加,分别用NH4Cl和NAC干预后均有保护作用。喹乙醇分别作用于INS-1细胞24h和48h后,P53蛋白表达量增加。结论:喹乙醇可以诱导大鼠胰岛细胞DNA损伤,对大鼠胰岛细胞有遗传毒性, NAC和NH4Cl均可对喹乙醇所致的DNA损伤起到保护作用,说明喹乙醇DNA损伤的途径是氧化应激和溶酶体途径。喹乙醇可使p53蛋白表达量增加,表明喹乙醇可使与癌有关基因表达增加,其机制可能是DNA的持续损伤。
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