单纯疱疹病毒1型包膜糖蛋白G的原核表达克隆的构建、表达与初步纯化

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IgM特异性血清学试验在诊断急性病毒感染方面非常有价值,但对HSV-1感染诊断来说,目前采用的IgM血清学检测方法的敏感性和特异性均不理想,主要原因是迄今所采用的抗原仍为从感染HSV-1的细胞中提取的病毒抗原性物质,因此抗原纯度、特异性等方面存在问题,此外由于不同公司试剂盒所用抗原组成不同及缺乏统一的标准抗原,所以结果不尽人意。有资料显示,采用基因工程或化学方法合成的多肽或单一的特异性蛋白可作为血清学诊断的良好抗原,使得用人工方法获取HSV-1特异性抗原成为可能。本研究用PCR方法扩增HSV-1 Us4基因的抗原决定簇编码区,目的基因与原核表达载体PGEX-4T-2分别经双酶切后连接,转化宿主菌E coli.BL21,IPTG诱导表达,产物经亲和层析法初步纯化,经SDS-PAGE和Western-Blot对表达产物进行鉴定,结果证明该重组蛋白具有良好的抗原性,将有助于对HSV-1急性感染血清学诊断试剂的完善。
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