论文部分内容阅读
目的选取常用传统中药制剂艾迪和化疗药物顺铂,观察不同浓度、不同时间单药及联合用药对肺腺癌A549细胞周期、增殖抑制作用、诱导凋亡的影响,比较中药试剂艾迪及化疗药物顺铂合用前后对肺腺癌A549细胞的生长抑制情况,从而寻找出合适的艾迪的剂量联合小剂量的顺铂作用于肺癌细胞,并探索其可能存在的作用机制,从而为临床上更好的肺癌治疗提供理论和实验依据。方法肺腺癌A549细胞体外培养至对数生长期后进行实验,将细胞分为空白组、对照组、单药组、联合用药组,应用MTT法分别检测24h、48h、72h小时不同分组药物的细胞抑制率,同时在倒置相差显微镜下观察不同时段、不同分组药物处理后细胞形态的变化,最后用流式细胞仪(FACS)分析检测48h后单独及联合用药细胞周期及凋亡率的变化。结果1.单独用药对肺腺癌A549细胞的增殖抑制情况艾迪、顺铂对肺腺癌A549细胞都具有增殖抑制作用,表现为时间-浓度的依赖性,即随着时间及药物浓度的增加,细胞活性逐渐降低。2.联合用药对肺腺癌A549细胞的增殖抑制情况两药联合:选取小剂量0.25mg∕L顺铂,选用1.875mg∕ml、3.75mg∕ml、7.5mg∕ml、15mg∕ml艾迪,两药联合时呈现时间及浓度的依赖性,随着时间及浓度的增加,抑制率增强。与同浓度、同时间的单独用药组相比,所有联合用药的处理组增殖抑制率远远要高,差异具有明显的统计学意义(p<0.01)。而7.5mg∕ml艾迪联合常规剂量顺铂的增殖抑制率弱于15mg∕ml艾迪联合小剂量的顺铂。3.艾迪和顺铂对细胞形态的变化无论单独还是联合,较小剂量时,细胞死亡主要表现为凋亡,细胞贴壁较差,胞质浓缩,原有梭形结构消失,细胞形态变为类圆形。随着剂量及时间的增加,细胞活性明显降低,倒置相差显微镜观察可见大量类圆形坏死的细胞碎片。4.两药单独及联合对细胞凋亡及细胞周期的影响流式细胞仪检测(FACS)发现48h后,常规剂量的顺铂将细胞阻滞在S期,即S期细胞数量增加。而艾迪处理组与对照组比较,G2∕M期细胞比例增加,G0∕G1期、S期细胞比例明显降低,并且随着浓度的增加,阻滞程度越明显,说明AIDI将细胞阻滞在G2∕M期。联合用药时发现S期比例比常规顺铂处理组低,但比对照组和艾迪组高,G2∕M期比15mg∕ml艾迪处理组低,但比对照组和顺铂处理组高,说明两药联合表现为S期、G2∕M期共同阻滞,且调亡率远大于单独用顺铂组和艾迪组,对比具有统计学意义(p<0.01)。结论艾迪、顺铂对肺腺癌A549细胞均有较好的细胞阻滞及促进凋亡作用,并呈现出时间-剂量依赖性,其机制可能与诱导细胞凋亡有关。结合相关文献及预实验结果,选用15mg∕ml艾迪联合小剂量的顺铂同样能够达到甚至超越单独常规剂量0.5mg∕L顺铂对肺腺癌A549细胞的作用,减少了细胞毒作用,增强化疗药物的敏感性,提高药物的疗效,从而为临床上化疗提供了新的制剂,并减少了因化疗带来的不良反应。而艾迪药物浓度超过15mg∕ml,细胞几乎全部死亡,表明大剂量的艾迪对肺癌A549细胞具有强烈的毒副反应,故将艾迪的浓度最大调整为15mg∕ml。