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枯草芽孢杆菌G8对多种植物病原真菌具有拮抗作用,其抑菌机制是产生抗菌蛋白。本论文对G8的发酵培养基组分和发酵条件进行了优化,测定了抗菌蛋白的部分理化性质并对其进行了分离纯化,为研究抗菌蛋白的性质和结构、防病机理及菌株的遗传改良奠定基础。1、为提高枯草芽孢杆菌G8抗菌蛋白的产量,采用单因素和正交试验设计,通过摇瓶培养对枯草芽孢杆菌G8产生抑菌活性物质的发酵培养基和发酵条件进行优化。结果表明,优化培养基配方(g/L)为:玉米淀粉5g、大豆蛋白胨5g、NH4Ac 20g、CaCO3 0.5g;最适接种体培养时间12h;适宜发酵条件为:初始pH 7、温度35℃、接种量3%、装液量70～100mL/250mL、转速180r/min、最佳培养时间48h。在上述优化条件下获得发酵液活性是LB培养基的2.1倍,硫酸铵沉淀后蛋白质浓度达103.9mg/L,为LB培养基的2.3倍。2、为明确枯草芽孢杆菌G8抗菌蛋白的理化性质,研究了温度、pH、金属离子、表面活性剂和蛋白酶对其稳定性的影响,并使用特殊培养基测定了其分解特定底物的能力。结果表明,该抗菌蛋白具有较强的热稳定性,100℃处理1h后基本保持完全的活性,121℃高压处理30min后,仍能保持90%以上的活性;对酸较稳定,可忍受pH为2的酸度;对金属离子不敏感;和表面活性剂可发生相互作用;对胰蛋白酶和胃蛋白酶有一定耐受力,对蛋白酶K较敏感。底物特异性试验表明活性蛋白不是几丁质酶、羧甲基纤维素酶和β-1,3-葡聚糖酶。3、硫酸铵沉淀的样品经Sephadex G-100凝胶层析、Cellulose DE-52阴离子交换层析、CM Sepharose CL-6B阳离子交换层析、Pheny-Sepharose 6 FF疏水层析,结合SDS-PAGE、Tricine-SDS-PAGE和活性测定,推测该活性物质为分子量约4000Da的肽类。盐酸沉淀、甲醇抽提后的样品经TLC、IR分析表明可能是一线形脂肽类物质。4、评价了枯草芽孢杆菌G8抗菌蛋白对黄瓜菌核病菌的抑制效果。采用菌丝生长速率法测定了其对黄瓜菌核病菌Sclerotinia sclerotiorum菌丝生长的毒力,结果表明,此抗菌蛋白对黄瓜菌核病菌菌丝生长的EC50值为12.4μg/mL,明显低于对照药剂乙霉威及嘧霉胺。此外,渗透势试验发现该抗菌蛋白可使黄瓜菌核病菌菌丝细胞膜透性发生变化,致使胞内物质外渗,病菌菌丝明显变细。