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为了进一步探明从我国北方6个地区水稻田根据乙炔还原活性分离的根际细菌的固氮能力,寻找有效应用途径做了以下研究。1、用15N示踪法测定结果,18种供试菌的15N原子百分超在0.39-0.67%之间。可见全部具有固氮能力。其中Azotobacter-armeniacus、A.-nigricans、Bacillus-sphaericus 3种菌的固氮量特别高。2、用nif基因探针杂交结果,当用pSA30的nifHDKYE基因片段杂交时17种供试菌DNA全部出现同源杂交信号;用pHU8的nifH基因片段杂交时,14种菌出现杂交信号,3种菌无阳性反应。根据15N示踪和nif基因杂交结果,可以肯定18种菌全部有固氮能力。在18种菌中,14种菌有作为固氮菌的报道,Bacillus-azotoformans、Bacillus-sphaericus、Enterobacter-intermedium、Pseudomonas-azototofotmans 4种菌,经生物学、生物技术、土壤学、微生物学、植物学等文摘的光盘检索,还未发现作为固氮菌的报道,待进一步查。在国内,除Enterobacter clorcae外,均未见分离的报道。3、将各种菌两两循环混合结果,一部分种之间混合可明显增加固氮活性(增效),增效范围在2-10倍,异地菌混合可大大增加混合效果。菌之间固氮活性的增效或减效是种之间稳定的关系。根据增效关系,构建了高固氮活性的优势组合。用不同的温度、pH值、NH4+浓度、C源、N源及除草剂浓度处理混合菌和相应单菌结果,混合菌的固氮活性在变化的环境下均表现稳定,耐性显著提高。当NH4+浓度43ppM时混合菌的固氮活性仍没有受抑,而单菌活性只剩下20%。在不同条件下混合菌与单菌的生长量变化基本一致。4、将17种固氮菌与混合菌分别接种于无菌稻苗,培养10天后,用扫描电镜观察结果,均有细菌定植,聚菌最多的是根毛基部和根表裂缝。混合菌接种苗根部菌体最多。而不接菌苗根表未发现菌。用2元混合菌(2种菌)与多元混合菌(8种)做盆栽和小区接种试验结果,显著提高全生育期稻根际土乙炔还原活性。盆栽稻增产25%(2元菌)和29%(多元菌),小区试验增产21%和37%。