雌二醇对IL-36β诱导小鼠脾单个核细胞中JAK3/STAT2通路激活及Akt、IL-17A表达的影响

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【目的】  探讨雌二醇对IL-36β诱导小鼠脾单个核细胞中JAK3/STAT2信号通路激活及Akt、IL-17A 表达的影响。  【方法】  选取6~8周龄SPF级C57BL/6健康雌性小鼠3只,以脊椎脱臼法处死,75%酒精溶液浸泡3 min;分离脾脏并研磨制备细胞悬液,密度梯度离心法获得单个核细胞悬液。单个核细胞置于培养皿中(每皿1.5×107个细胞),分为雌二醇组、IL-36β组、IL-36β+雌二醇组、空白对照组,分别加入10 nM雌二醇、10 ng/ml IL-36β、雌二醇+IL-36β、培养液;30 min后用Western blot检测JAK3、p-JAK3、STAT2、p-STAT2、Akt、p-Akt蛋白表达;6 h、12 h、24 h后用实时定量荧光PCR(qRT-PCR)检测IL-17 A mRNA表达。  【结果】  1. 雌二醇对IL-36β诱导单个核细胞中JAK3/STAT2通路、Akt表达的影响  各组JAK3、STAT2、Akt表达无明显变化;雌二醇组p-JAK3、p-STAT2表达较空白对照组增多,而p-Akt表达较空白对照组减少;IL-36β组p-JAK3、p-STAT2、p-Akt表达明显高于空白对照组及雌二醇组;IL-36β+雌二醇组p-JAK3、p-STAT2、p-Akt明显低于IL-36β组。  2. 雌二醇对IL-36β诱导单个核细胞中IL-17 A mRNA表达的影响  IL-36β组IL-17 A mRNA表达在3个时间点明显高于空白对照组、雌二醇组、雌二醇+IL-36β组(P<0.01);IL-36β+雌二醇组IL-17 A mRNA表达在6 h、12 h高于雌二醇组(P<0.01-0.05)、12 h高于空白对照组(P<0.01)。  【结论】  1. 雌二醇抑制C57BL/6雌性小鼠脾单个核细胞中IL-36β诱导JAK3/STAT2通路激活。  2. 雌二醇抑制C57BL/6雌性小鼠脾单个核细胞中IL-36β诱导Akt磷酸化和IL-17A表达。
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