人胰腺癌组织块小鼠皮下移植瘤模型的构建及生物学行为的观察

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1.目的:通过直接移植胰腺癌患者的肿瘤组织块到小鼠皮下来建立胰腺癌小鼠皮下移植瘤模型,并进行肿瘤的体内传代及免疫组化检测,探讨其生物学特性。2.方法:2.1在患者进行外科手术时,由手术者配合,获取人的胰腺癌肿瘤组织块标本,并在1小时内将组织块种植在NOD/SCID (?)、鼠颈背部皮下,建立第一代来源于人胰腺癌肿瘤组织块的NOD/SCID小鼠皮下移植瘤模型。观察至少4周时间,待瘤体长径达到8mm以上时,可处死小鼠并取出肿瘤,并移植到第二代NOD/SCID (?)、鼠皮下,进行移植瘤的体内传代,第二代以后亦可选用裸鼠进行传代,建立人胰腺癌组织块来源的裸鼠皮下移植瘤模型,并继续观察肿瘤生长情况。2.2每一代肿瘤从小鼠体内取出后可留取部分组织进行多聚甲醛固定及石蜡包埋,切片行HE染色,并采用免疫组织化学染色法检测增殖细胞核抗原(Ki67)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况。3.结果:3.1第一代NOD/SCID (?)、鼠移植瘤模型的建立及体内传代情况:一共收集了19例胰腺癌患者肿瘤组织标本移植到NOD/SCID小鼠皮下,术后病理证实均为腺癌,组织来源分别包括胰腺癌原发病灶,肝脏转移灶及网膜转移灶;第一代移植瘤成功例数共5例,4例来源于胰腺导管腺癌原发病灶,1例来源于网膜转移灶,成功率为26.3%,仅计算大标本组织块来源的建模成功率则为38.5%。成功的5例中,第1例已成功传至第4代小鼠,并已成功建立来源于人胰腺癌组织块的裸鼠皮下移植瘤模型,其余4例已传至第2代。第一代移植瘤生长周数为5.6±1.1周,瘤体平均大小为507.83±426.05mm3。并且随着小鼠体内传代次数的增加,肿瘤生长速度加快。3.2HE染色:比较人胰腺癌组织和各代小鼠移植瘤组织的HE染色,其组织病理形态结果显示基本一致,与其来源的原始肿瘤相似。3.3Ki67和VEGF免疫组化染色:二者在病人组织及各代移植瘤内均为阳性表达,Ki67为细胞核着色,VEGF为细胞质着色,人胰腺癌组织、第一代NOD/SCID、第二代NOD/SCID、第三代NOD/SCID小鼠、第二代裸鼠和第三代裸鼠移植瘤组织Ki67表达的累积光密度(IOD)值分别为(1.15±0.42)x104、(1.65±0.80)x104、(2.89±0.31)x104、(3.29±0.42)x104、(3.25±1.16)x104、(3.41±1.09)x104;VEGF表达的IOD值分别为(0.12±0.09)x104、(0.18±0.08)x104、(0.30±0.09)x104、(0.41±0.18)x104、(0.19±0.07)x104、(0.30±0.16)x104。二者总体都呈现出表达增强的趋势。4.结论:直接移植胰腺癌患者的肿瘤组织块可以成功建立胰腺癌小鼠皮下移植瘤模型,该移植瘤组织形态与其来源较为相似,可稳定传代,对于胰腺癌的肿瘤微环境、基因表达、放化疗干预等研究有着十分重要的意义。
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