目前抗生素的滥用导致很多耐药性的菌株出现,人们迫切找到抗生素的替代品。抗菌肽具有抗菌活性高、抗菌谱广、不会导致耐药性等优点,使抗菌肽称为替代抗生素的优良替代品。莱茵衣藻是时佩璞安全级的藻类,在动物饲料中可以直接添加,并且存在大量的突变体,以及全部基因都已经测序完成,所以用莱茵衣藻作为模式生物进行研究具有很大优势。本论文研究的抗菌肽ToAmP4于2012年在蒲公英种首次发现,呈现碱性,由41个氨基酸组成,分子中有三个二硫键,具有广谱抗菌性,在原核表达系统中成功表达且具有生物活性。本课题是在真核生物莱茵衣藻里表达抗菌肽ToAmP4,并表达后对其生物活性进行研究。要研究抗菌肽在莱茵衣藻里的表达就要构建莱茵衣藻的表达载体,本实验构建了两套表达载体—Ble-FMDV-HA-6His-ToAmP4 和 Ble-FMDV-HA-6His-ToAmP4×3。前者是单拷贝的抗菌肽,是直接通过酶切连接的方法构建;后者是三倍体的抗菌肽,是通过PCR获得目的片段,然后再进行酶切连接构建。把构建好的莱茵衣藻表达载体用电转化的方式转进野生型莱茵衣藻(CC125)中,用免疫印迹的方法进行藻种筛选。其中单拷贝的藻种筛选概率为6.7%,三拷贝筛到藻种的概率为10.9%。但是在单拷贝的藻种里没有得到切割下来的目的片段,而在三拷贝的抗菌肽中则得到了切割下来的口的片段。用ELISA的方法测定目的蛋白在总蛋白中的含量,结果显示目的蛋白占总蛋白的0.32%。用三拷贝的抗菌肽进行用镍柱纯化后冻干进行生物活性研究,最小抑菌浓度(MIC)实验抗菌肽浓度为50μg/mL时对大肠杆菌O157的抑制率为93.4%,对金黄色葡萄球菌的抑制率达到96.4%。琼脂糖扩散实验(抑菌圈实验)中在抗菌肽浓度为50μg/mL时对大肠杆菌O157的抑菌圈直径为14mm,在抗菌肽浓度为40μg/mL时对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为18mm。本实验成功构建了两套莱茵衣藻的表达载体Ble-FMDV-HA-6His-ToAmP4和Ble-FMDV-HA-6His-ToAmP4×3,成功的转进了野生型莱茵衣藻中,并且均获得表达。抗菌肽ToAmP4在莱茵衣藻表达后都具有生物活性。在莱茵衣藻作为模式生物表达抗菌肽对抗菌肽在真核生物中的表达提供了理论支持,由于莱茵衣藻为食品安全级别的生物,该研究在动物饲料添加剂方面具有重大意义,在提高表达量的前提下,对在食品中的应用也有很大意义。