第一部分.肾血管性及自发性高血压大鼠左心室肥厚的比较 目的：左心室肥厚是心肌工作超负荷的一种适应性反应，是引起心血管疾病发生率和死亡率显著升高的独立危险因素。肾血管性高血压和自发性高血压大鼠(spontaneouslyhypertensiverats，SHR)均可发生左心室肥厚，然而，引起二者左心室肥厚的分子机制是否相同目前尚不清楚。因此，本实验采用上述两种模型，比较二者左心室肥厚的异同。 方法：采用两肾两夹法(twokidneytwoclip，2K2C)建立肾血管性高血压大鼠模型。术后4周筛选出符合要求的大鼠，随机分为3组，各8只：第一组作为两肾两夹4周组；第二组作为两肾两夹8周组，继续喂养4周；第三组作为两肾两夹12周组，继续喂养8周。并同时设立相应假手术对照组：第四组作为对照4周组；第五组作为对照8周组；第六组作为对照12周组。同时，周龄匹配的SHR分为3组：第七组作为SHR8周龄组；第八组作为SHR12周龄组；第九组作为SHR16周龄组。实验结束时，行超声心动图检查后，左心室插管检测血流动力学指标，处死大鼠，留取左心室标本并称重，计算左室重量指数，HE染色观察心肌超微结构。 结果： 1.各组大鼠手术前基础血压约110mmHg，两肾两夹术后两周，血压上升至147±9mmHg，术后四周血压高于170mmHg，此后血压继续升高，于术后六周达峰值(218±14mmHg)，并维持至术后12周。同时，SHR组大鼠随年龄增长血压呈进行性升高，均显著高于周龄匹配的对照大鼠。 2.与对照组相比，各组2K2C大鼠及SHR心脏体积明显增大，左心室重量增加，左室重量指数(LVW/BW)明显增高，差异具有显著性。 3.与对照组相比，手术后4周的2K2C大鼠及不同周龄的SHR，其室间隔及左室后壁厚度均明显增加，同时，左室内径显著减小，呈现出明显的向心性肥厚。而手术后8周及12周的2K2C大鼠，其室间隔及左室后壁厚度均较假手术组明显减小，左室内径显著增大，呈明显的离心性肥厚。 4.手术后8周、12周的2K2C大鼠以及16周龄的SHR，其EF、FS、±dp/dtmax均较对照组相比显著降低，LVEDP以及T值明显升高。 结论：两肾两夹高血压大鼠和自发性高血压大鼠都发生了相同程度的左心室肥厚，且随时间延长，心功能都不同程度的下降。但是二者的肥厚表型不同：两肾两夹高血压大鼠呈明显的离心性肥厚，而自发性高血压大鼠呈明显的向心性肥厚。 第二部分.肾血管性及自发性高血压大鼠心肌组织的比较蛋白质组学研究 目的：采用肾血管性及自发性高血压大鼠左心室肥厚模型，运用蛋白质组学技术，寻找肾血管性高血压、自发性高血压与血压正常大鼠间心肌的差异表达蛋白质，并对这些差异表达蛋白分子进行鉴定，为新药设计提供一些新思路。 方法：来自于两肾两夹术后12周、对照12周以及16周龄自发性高血压大鼠左心室的12个蛋白质样品(n=4)，分别用荧光染料Cy3、Cy5标记，以及12个样品等量混合物用Cy2标记作为内标，每一Cy3、Cy5标记样品与Cy2标记的内标等量混合后在同一块胶中进行电泳分离，经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱，经DeCyder图像分析软件分析，寻找三组间的差异蛋白。并运用MALDI-TOF-TOF串联质谱仪对差异蛋白质进行鉴定。同时运用Westernblot以及RT-PCR对差异蛋白质进行进一步验证。 结果：经DeCyder图像分析软件分析，以相差2倍以上的蛋白作为差异蛋白质，结果发现：2K2C组相对于对照组有19个差异蛋白点，其中3个蛋白表达上调，16个蛋白表达下调；SHR组相对于对照组有23个差异蛋白点，其中6个蛋白表达上调，17个蛋白表达下调；2K2C组和SHR组之间有20个差异蛋白点，其中9个蛋白表达上调，11个蛋白表达下调。运用质谱技术鉴定出5个差异蛋白，它们分别为：α-烯醇化酶、短链脂酰辅酶A脱氢酶、NADH脱氢酶α亚复合体10、谷胱甘肽-s-转移酶，mu2以及β-肌球蛋白重链。其中，与2K2C组相比，SHR组α-烯醇化酶表达上调；短链脂酰辅酶A脱氢酶和谷胱甘肽-s-转移酶，mu2在SHR组显著降低，而在2K2C组无明显变化；NADH脱氢酶α亚复合体10在2K2C和SHR组中均明显下调；而β-肌球蛋白重链在两种模型中的表达均上调。同时，分别对这5个差异蛋白采用Westernblot以及RT-PCR方法进行了验证，结果与2-DE的趋势基本一致。 结论：两肾两夹高血压、自发性高血压以及血压正常大鼠间心肌蛋白质组存在差异；α-烯醇化酶、NADH脱氢酶1α亚复合体10、短链脂酰辅酶A脱氢酶和谷胱甘肽-s-转移酶，mu2可能参与了高血压性左心室肥厚；同时，短链脂酰辅酶A脱氢酶和谷胱甘肽-s-转移酶，mu2可能作为自发性高血压大鼠左心室肥厚相关的候选蛋白。 第三部分.依那普利对肾血管性及自发性高血压大鼠相关差异蛋白质表达的影响 目的：观察依那普利对肾血管性及自发性高血压大鼠相关差异蛋白质表达的影响，以观察差异蛋白质在两种模型中的作用。 方法：建立两肾两夹高血压大鼠模型，对照组和2K2C组于手术后4周开始给药；7周龄自发性高血压大鼠正常饲养1周后开始给药。实验共分5组：(1)对照组：以等量0.5％羧甲基纤维素钠灌胃；(2)2K2C组：以等量0.5％羧甲基纤维素钠灌胃；(3)2K2C+依那普利组：依那普利10mg/kg/d；(4)SHR组：以等量0.5％羧甲基纤维素钠灌胃；(5)SHR+依那普利组：依那普利10mg/kg/d。各组均灌胃8周，每周测体重，按体重调整用药。实验结束时，行超声心动图检查后，左心室插管检测血流动力学指标，处死大鼠，留取左室标本并称重，计算左室重量指数，HE染色观察心肌超微结构。 结果： 1.2K2C及SHR组血压及左室重量指数均显著高于对照组，给予依那普利后的2K2C及SHR组，其血压及左室重量指数均明显下降，具有显著性差异。 2.与对照组相比，2K2C大鼠室间隔及左室后壁厚度均明显减小，左室内径显著增大，呈明显的离心性肥厚。而SHR组室间隔及左室后壁厚度均明显增加，同时，左室内径显著减小，呈现出明显的向心性肥厚。2K2C组给予依那普利后，室间隔及左室后壁厚度均显著增加，左室内径明显减小；而SHR组给予依那普利后，室间隔及左室后壁厚度均显著减小，左室内径明显增大，与相应模型组比较，均具有显著性差异。 3.2K2C和SHR组EF、FS及±dp/dtmax显著下降，LVEDP和T值均显著升高。而依那普利治疗后的2K2C及SHR组EF、FS及±dp/dtmax明显上升，LVEDP和T值均明显下降，两组大鼠心功能均得到明显改善。 4.与2K2C组相比，α-烯醇化酶在SHR组中的表达明显上调，而依那普利治疗后的SHR组，α-烯醇化酶的表达与相应模型组相比无明显差异；短链脂酰辅酶A脱氢酶和谷胱甘肽-s-转移酶，mu2在SHR组显著降低，而2K2C组无明显变化，经依那普利治疗后，二者的表达变化未得到明显逆转；NADH脱氢酶α亚复合体10在2K2C和SHR组中均明显下调，依那普利治疗后，未改变其在两种模型中的变化；β-肌球蛋白重链在2K2C和SHR组中的表达均上调，而依那普利治疗后，β-肌球蛋白重链在两种模型中的表达均明显下调，与对照组相比，无显著性差异。 结论： 1.依那普利能显著降低两肾两夹高血压大鼠及自发性高血压大鼠的血压，逆转二者的左心室肥厚，改善心功能。 2.依那普利能显著逆转β-肌球蛋白重链在两肾两夹高血压大鼠及自发性高血压大鼠中的差异表达。但不能逆转α-烯醇化酶、NADH脱氢酶α亚复合体10、短链脂酰辅酶A脱氢酶和谷胱甘肽-s-转移酶，mu2在两种模型中的差异表达。