脐带间质干细胞治疗肾脏缺血再灌注损伤的实验研究

来源 :江苏大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xumingxingHUANG
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目的体外获得充足的移植用人源脐带间质干细胞(humanumbilical cord mesenchymal stem cells,ucMSCs)并进行鉴定和生物学特性研究;建立大鼠肾脏缺血再灌注致急性肾功能衰竭(acute renalfailure,ARF)模型,评价经颈动脉注射ucMSCs对大鼠ARF的治疗效果及初步探讨其可能机制。方法采用组织块贴壁法建立稳定的ucMSC培养方法,并通过形态、超微结构、表面标志及基因表达等多方面鉴定其基本生物学特性,不同条件培养状态下观察其肾相关生物学特性;采用背部肾区小切口的手术方法摸索大鼠肾缺血再灌注损伤模型的条件,选定双侧肾蒂夹闭60min再灌注的条件建立大鼠肾脏缺血再灌注导致急性肾损伤模型;体内于损伤后16h将1.0×10~6ucMSCs经左颈动脉输注损伤大鼠模型,分别于损伤0h、16h、24h、48h、72h采集尾静脉血检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)浓度,综合运用分子生物学、免疫组织化学、病理学、定量PCR等技术,与生理盐水输注组及假手术组对比,评价间质干细胞(MSCs)的治疗效果并找寻修复肾损伤的机制。结果体外培养ucMSCs具有与骨髓MSCs相似的基本生物学特性,但在细胞因子表达方面有一定差异,肝细胞生长因子(HGF)表达较高而胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的表达则较弱,在因子诱导、缺氧/复氧、共培养条件下ucMSCs具有向肾组织分化的趋势且分泌肾保护因子增加。体内ucMSC移植组较对照组Cr、BUN水平显著降低(p<0.05),病理结果显示移植组肾组织炎症细胞浸润及充血情况明显好于对照组,PCR及免疫组化结果均显示人源性细胞定位在肾损伤部位,但在移植ucMSCs 48小时内并未发现向肾脏细胞分化,增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化结果则显示ucMSCs可以有效地提高损伤部位肾小管上皮细胞的增殖能力,实时定量PCR检测发现移植组肾组织细胞凋亡基因caspase-3以及IL-1β等炎症因子表达降低。结论ucMSCs可能通过旁分泌因子修复缺血再灌注导致的急性肾损伤,可以作为肾脏疾病治疗理想的细胞来源之一。
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