【摘 要】
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背景和目的:白癜风是一种后天的,表现为色素脱失性皮肤病,临床上表现为皮肤、黏膜白斑,病理主要为黑素细胞的减少乃至消失。有研究表明,线粒体可以调控细胞因子的产生,调节钙离子的代谢,最终导致黑素细胞丢失。积雪草是一种传统中医药物,具有很多医学作用,如创伤愈合和抗氧化。临床上也发现它可用于白癜风复色。本研究旨在研究羟基积雪草苷对氧化应激下人黑素细胞作用效果及机制。因此,我们用过氧化氢模拟氧化压力环境,研
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背景和目的:白癜风是一种后天的,表现为色素脱失性皮肤病,临床上表现为皮肤、黏膜白斑,病理主要为黑素细胞的减少乃至消失。有研究表明,线粒体可以调控细胞因子的产生,调节钙离子的代谢,最终导致黑素细胞丢失。积雪草是一种传统中医药物,具有很多医学作用,如创伤愈合和抗氧化。临床上也发现它可用于白癜风复色。本研究旨在研究羟基积雪草苷对氧化应激下人黑素细胞作用效果及机制。因此,我们用过氧化氢模拟氧化压力环境,研究羟基积雪草苷对氧化压力下正常人黑素细胞线粒体结构和功能变化的影响并初步探讨其机制。方法:正常的人黑素细胞予0.01 mM过氧化氢处理,再予不同浓度的羟基积雪草苷（0、10、50、100μg/mL）。评估人黑素细胞树突的回缩速率,流式细胞术及细胞内游离钙浓度（[Ca2+]i）检测线粒体膜电位（MMP）,透射电子显微镜（TEM）观察线粒体超微结构,吖啶橙染色检测自噬,蛋白质印迹检测自噬体形成的指标LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值。结果:①不同浓度（0.01,0.005,0.001 mM）H2O2刺激前和刺激后300分钟,H2O2可引起树突回缩,0.01mM H2O2可引起较明显树突回缩。②采用0.01mM H2O2模拟氧化应激环境,在10,50,100 μg/mL浓度积雪苷保护下,树突仅发生轻微的收缩,回缩速率明显减缓。③氧化应激下,线粒体膜电位可从（98.68±3.28）%降至（41.57±3.91）%。而在10,50,100μg/mL浓度羟基积雪草苷下,膜电位分别降为（58.28±5.07）%,（91.87±4.52）%,（76.42±4.06）%。④氧化应激下,细胞内钙离子浓度会上调,为（79.56±2.38）,而在10,50,100 μg/mL的羟基积雪草苷的作用下,可减少线粒体内钙离子的积聚,细胞内钙离子分别为（69.80±2.05）、（55.33±3.31）、（42.71 ±2.07）。⑤线粒体形态结构定量研究示空白组Nv、Sv、Vv分别为8.25±0.98μm-2、3.66±0.76‰、5.34±0.95%;H202组Nv、Sv、Vv分别为3.84±1.03 μm-2、6.93±0.84‰、9.13±1.06%;H2O2+10μg/mL madecassoside组Nv、Sv、Vv分别为5.73±0.94μm-2、5.81±1.01‰和7.99±0.88%,H2O2+50μg/mL madecassoside组Nv、Sv、Vv分别为7.22±0.95μm-2、4.03±0.75‰和6.27±0.92%;H202+100μg/mL madecassoside组Nv、Sv、Vv分别为6.49±0.87μm-2、4.68±0.96‰和6.85±0.78‰⑥吖啶橙染色和透射电镜观察发现,空白对照组黑素细胞结构完整;H202组可对线粒体造成明显损伤,表现为线粒体肿胀,嵴排列混乱甚至断裂,有的可出现空泡样改变;H2O2+10μg/mL、H2O2+50μg/mL和H2O2+100μg/mL羟基积雪草苷组诱导黑素细胞发生明显的自噬,且观察到线粒体自噬,线粒体氧化损伤明显减轻,有时可见到正常线粒体结构。组间差异有统计学意义（p＜0.05）。⑦Western blotting结果显示（10,50,100 μg/mL）羟基积雪草苷组LC3-Ⅱ和LC3-Ⅰ的蛋白表达明显高于空白对照组及过氧化氢组。LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值,空白对照组较过氧化氢组高,10,50 μg/mL羟基积雪草苷组高于空白对照组。结论:羟基积雪草苷可以减轻氧化应激压力下黑素细胞中线粒体的损伤,对黑素细胞的线粒体具有保护作用,这种保护机制可能是通过诱导细胞发生自噬完成的。
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