本论文以抗肿瘤药物奥希替尼片和我国自主研发的1.1类新药重组人鼠嵌合型抗CD20单克隆抗体注射液(SCT400)为研究对象,分别建立了快速、灵敏的超高效液相色谱质谱联用法(ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)测定人血浆和脑脊液中奥希替尼的浓度,并使用二代测序技术分析了血浆和脑脊液中循环肿瘤DNA(circulating tumour DNA,ctDNA)基因变异;建立了酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分析人血清中SCT400和利妥昔单抗的药物浓度和免疫原性,同时建立了UPLC-MS/MS法测定人血清中SCT400药物浓度,比较两种检测方法一致性。上述研究的进行为这两种药物的临床药代动力学研究以及治疗药物浓度监测、药效学等方面的研究提供了评价方法和合理用药依据。主要研究内容分为两个部分:第一部分:分析非小细胞肺癌脑膜转移患者血浆和脑脊液样本中奥希替尼的药物浓度及循环肿瘤DNA基因变异恶性肿瘤脑膜转移的患者具有病情进展快、治疗效果差及生存期短等特点。奥希替尼(AZD9291)是第三代表皮生长因子受体—酪氨酸激酶抑制剂(epithelial growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)。为了进—步探索奥希替尼对于NSCLC肺癌脑膜转移患者的疗效,进行了以下研究:第一章:建立UPLC-MS/MS法测定NSCLC脑膜转移患者血浆和脑脊液中奥希替尼药物浓度。使用蛋白质沉淀进行样品前处理制备。方法学验证结果显示血浆样品和脑脊液样品奥希替尼在标曲曲线2-500 ng/mL和0.5-20 ng/mL范围内线性较好,血浆和脑脊液样品批间和批内精密度范围分别为1.96%-9.34%和3.04%-9.73%,准确度范围分别为-13.40%-4.40%和-9.75%-3.13%;血浆奥希替尼低和高质控浓度的相对提取回收率分别为101.5%和103.5%,脑脊液中的提取回收率分别为105.7%和94.9%;血浆和脑脊液中存在基质增强效应,但同一浓度不同个体以及不同浓度间的差异较为一致;血浆和脑脊液样品室温放置4h,4℃进样器放置12 h均稳定。方法学达到临床样本检测要求。完成全部方法学验证后,成功检测了1例经吉非替尼治疗失败后进展的非小细胞肺癌脑膜转移患者的4份血浆动态样本和8份脑脊液动态样本中的药物浓度。血浆样本中奥希替尼的平均药物浓度为105.13ng/mL,脑脊液样本中平均药物浓度1.60 ng/mL,从而计算得到的奥希替尼血脑屏障透过率为1.47 ± 0.3%。第二章:应用高通量二代测序技术对比分析非小细胞肺癌脑膜转移患者血浆和脑脊液中ctDNA的基因变异情况。使用1021个基因panel动态分析了 4份血浆和8份脑脊液样本中基因突变、拷贝数变异和融合等分子事件。在血浆和脑脊液样本中均检测到mTOR、EGFR、CHECK1、ABCC11和TP53 5种一致的基因突变,5种基因突变中,mTOR基因的平均突变频率最高。脑脊液样本中ctDNA的基因突变检出率高于血浆样本(50%和25%)。使用分子肿瘤负荷指数(molecular tumour burden index,mTBI)定量分析4份脑脊液样本中分子肿瘤负荷分别为(15.62%、3.93%、13.16%和16.41%)。综合分析不同治疗周期的脑脊液样本中的基因变异,5种突变基因的平均突变频率和mTBI与患者的治疗疗效呈负相关,药物浓度的动态变化与患者的治疗疗效呈正相关。提示脑脊液中ctDNA可以作为监测脑膜转移患者的疗效预测生物标志物。第二部分:分析人血清中重组人鼠嵌合抗CD20单克隆抗体注射液(SCT400)与利妥昔单抗的药物浓度和免疫原性神州细胞工程有限公司研制的重组人鼠嵌合抗CD20单克隆抗体注射液SCT400(SCT400为产品内部编码)是一种人鼠嵌合IgG1型抗CD20单克隆抗体,能特异性地与跨膜抗原CD20结合。SCT400的临床前和I期临床研究结果显示SCT400和已上市的药物利妥昔单抗在质量、临床前药效、临床药代动力学特征、安全性评价等方面,二者具有高度相似和可比性。本研究旨在进一步比较SCT400与利妥昔单抗注射液在CD20阳性B细胞非霍奇金淋巴瘤患者单次给药的药代动力学特征、药效学及安全性。具体研究内容如下:第一章:分析人血清中两种抗CD20单克隆抗体药物的药物浓度。首先,建立ELISA法测定人血清中SCT400与利妥昔单抗的浓度。方法学验证结果显示SCT400和利妥昔单抗在标准曲线1.56-50ng/mL范围内线性良好,SCT400批内和批间精密度范围为3.52%-16.32%,准确度范围为-19.70%-8.14%;利妥昔单抗批内和批间精密度范围为1.74%-22.55%,准确度范围为-22.02%-15.50%;未发现明显基质干扰现象;不同储存条件下,SCT400与利妥昔单抗保存稳定;不同稀释倍数浓度间平行性良好。该方法已经成功用于临床试验样本中SCT400和利妥昔单抗药物浓度检测。其次,建立UPLC-MS/MS法测定人血清中SCT400与利妥昔单抗的浓度。使用酶解技术,筛选出了 SCT400的特征性肽段,合成特征性肽段标准品,建立了UPLC-MS/MS检测人血清中SCT400药物浓度的方法,完成部分方法学验证,检测了临床样本,进行两种方法的一致性评价。第二章:分析人血清中两种抗CD20单克隆抗体药物免疫原性。建立ELISA法测定人血清中SCT400与利妥昔单抗的免疫原性。方法学验证结果显示使用阳性抗体配制标准曲线,在标准曲线3.13-1O0ng/mL范围内线性良好,SCT400包被检测的阳性抗体的批间和批内测定准确度范围为-9.53%-13.02%,精密度范围为0.73%-15.47%;利妥昔单抗包被检测的阳性抗体的批间和批内测定准确度范围为-9.13%-12.36%,精密度范围为1.54%-16.84%;未发现明显基质干扰现象;不同储存条件下,阳性抗体保存稳定。耐药性结果显示,质控浓度为80ng/mL的阳性抗体,在不同浓度SCT400和利妥昔单抗药物存在下,当药物浓度为12.5μg/mL时,阳性抗体检测值低于筛选阈值,存在假阴性的结果,其摩尔比(Mol.Ratio)约为1:156;质控浓度为8ng/mL的阳性抗体,在不同浓度SCT400和利妥昔单抗药物存在下,当SCT400药物浓度为3.125μg/mL,利妥昔单抗药物浓度为1.5625μg/mL时,阳性抗体检测值低于筛选阈值,存在假阴性的结果,其摩尔比(Mol.Ratio)约为1:390和1:195。该方法已经成功运用于临床试验样本的免疫原性检测。临床试验样本经过初筛,筛选出具有阳性抗体的血清样本,进一步进行确证试验,确证试验结束后,对于真正具有阳性抗体的样本进行抗体的滴度检测。