论文部分内容阅读
背景与目的:肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)是一类源于肝内胆管上皮的恶性肿瘤,其发病率居原发性肝癌第二位,且呈逐年上升趋势。当前,该疾病研究的重点集中在ICC的发生发展机制上。microRNA(miRNA)是一类长度为18~25个碱基的非编码小分子RNA,已有大量研究报道miRNA在癌细胞的迁移、侵袭、增殖和分化等方面,发挥着重要的调控作用;但miRNA在ICC中是否发挥作用,目前相关研究仍十分缺乏。本课题依据芯片筛选数据,选取在胆道系统肿瘤中显著下调的miR-490-5p作为研究对象,研究它在ICC的发生发展中所起的作用及机制。方法:qPCR检测miR-490-5p在5对肝内胆管癌临床组织中的表达。在RBE细胞中过表达miR-490-5p mimics和Scramble-miRNA mimics,通过平板克隆形成、CCK-8实验、划痕实验、细胞凋亡实验,以及Transwell和Matrigel Transwell检测miR-490-5p对RBE细胞生物学行为的影响。通过在线miRNA靶基因预测软件预测miR-490-5p的靶基因;最终由荧光素酶报告基因实验结合WB实验验证miR-490-5p的靶基因。结果:miR-490-5p在人肝内胆管癌临床样本中的表达量显著低于癌旁组织(P<0.05);过表达miR-490-5p的RBE在单位时间内穿过Transwell小室膜以及Matrigel Transwell小室膜的细胞数量明显少于NC组(Transwell:P<0.0001;Matrigel transwell:P<0.05),单位时间内划痕愈合剩余面积明显大于NC组(P<0.05);但在CCK-8、平板克隆形成以及凋亡实验中两组无显著差别(所有结果均为P>0.05)。荧光素酶报告基因实验证实miR-490-5p与c-Fos 3’UTR区的两个预测位点同时结合时荧光值显著降低;miR-490-5p与ETS1 3’UTR区的三个预测位点中任意一个结合时荧光值显著降低。WB实验证实过表达miR-490-5p可下调c-Fos以及ETS1的蛋白表达水平。结论:miR-490-5p在人肝内胆管癌中低表达;miR-490-5p抑制RBE细胞的迁移和侵袭能力,对细胞的增殖、克隆形成及凋亡无明显影响;c-Fos和ETS1是miR-490-5p的靶基因。