腹腔内连续应用NGF对周围神经损伤后轴浆运输恢复作用的实验研究

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目的:探讨周围神经损伤后,应用神经再生室桥接神经,腹腔内连续注射神经生长因子(nerve growth factor,NGF),利用生物素葡聚糖胺(biotin dextran amine,BAD)神经示踪观察其对轴浆运输功能的恢复作用。方法:将26只成年Sprague-Dawley大白鼠随机分为3组:A组12只,为实验组;B组12只,为空白对照组;C组2只,为正常组。A、B组大白鼠双侧坐骨神经切除3mm形成缺损,用医用硅胶管桥接形成神经再生室。A、B组大白鼠手术时分别向神经再生室内注射NGF 0.04ml(40Au)和等量生理盐水,左右各半。术后每隔3天腹腔内分别注入等量NGF和生理盐水。术后观察两组大鼠足部溃疡及愈合情况。第2、4、6、8周显露坐骨神经,观察局部情况,将坐骨神经远端距桥接点5mm处结扎,近端距吻合处5mm注射10%BAD 1μL。18小时后再次麻醉,升主动脉插管灌注固定处死。将坐骨神经取出后以多聚甲醛溶液固定,蔗糖溶液沉底。切取桥接处和结扎点近侧各3mm神经标本。C组大白鼠的双侧坐骨神经远端距坐骨结节18mm处结扎,按照以上方法,在距坐骨结节5mm处注射10%BAD 1μL,18小时后获取结扎点近侧5mm神经标本。标本快速冰冻切片,行HE染色和神经示踪显色检测。分析A、B组的神经再生情况及轴浆运输功能恢复情况,有无显著性差异。结果:在第2、4、6、8周各个时间段实验组较对照组患肢足趾红肿程度轻、局部溃烂及足趾脱落少、溃疡面愈合快;神经再生室周围组织血管网丰富、再生神经粗大、表面光滑、弹性好、较早到达远端、与远端神经连接紧密;远端神经肿胀轻、肿胀减轻快。组织切片HE染色见两组神经均随时间延长神经纤维数目增加。实验组桥接处再生神经纤维数目多、直径粗、髓鞘厚、粗细均匀,较对照组明显,有显著性差异(P<0.05)。BDA神经示踪切片见术后第2、4周两组桥接处及远端神经均未见阳性标记神经纤维;术后第6周实验组桥接处神经可见阳性标记神经纤维,对照组桥接处神经及两组远端神经均未见阳性标记神经纤维;术后第8周两组桥接处及远端神经均见阳性标记神经纤维;第6、8周实验组阳性神经纤维数多、直径粗、显色深,两组之间有显著性差异(P<0.05)。结论:①周围神经损伤后腹腔内连续应用神经生长因子能促进神经再生和轴浆运输功能的恢复。②生物素葡聚糖胺(BAD)示踪法可观察轴浆运输功能恢复情况。
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