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研究背景：子宫颈癌占女性恶性肿瘤的第二位，仅次于乳腺癌，近年来该病的发病呈年轻化趋势。每年大约有500000名妇女被诊断为子宫颈癌，其中80%来自于发展中国家，而且有一半患者死于此病。早期子宫颈癌的首选方法目前主要是以手术为主，但是对于晚期、复发及转移的患者，手术治疗效果较差。同时，晚期宫颈癌患者因对化疗的耐药，以及体质较差等原因，疗效亦不十分理想。因此，寻找新的治疗子宫颈癌的方法具有十分重大的意义。近年来，随着表观遗传学的研究深入，多项研究证实组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases，HDACs)在肿瘤的发生、发展中发挥着重要作用，且可能为肿瘤治疗提供靶点。HDAC抑制剂主要通过诱导参与调节细胞活性的基因表达、抑制细胞增殖、促进细胞分化和诱导细胞凋亡等多种途径发挥作用杀伤肿瘤细胞。研究发现子宫颈癌组织中HDACs存在过表达，因此HDACs可能是治疗子宫颈癌的一个靶点。曲古菌素A(trichostatin A, TSA)源自链霉菌代谢产物,是一种抗真菌药物使用,同时也是强大HDAC抑制剂。全反式维甲酸（All-trans retinoic acid,ATRA）是一种具有调节细胞生长和分化的药物，其同时具有调控正常上皮细胞的分化作用。目前的临床实验已表明，ATRA在子宫颈癌和癌前病变化疗中具有诱导分化治疗作用。本研究选择子宫颈癌HeLa细胞株和SiHa细胞株以及荷人宫颈癌裸鼠模型为治疗对象，研究并探讨了TSA联合ATRA对子宫颈癌细胞的杀伤作用，并进一步探讨其相关机制。目的研究TSA联合ATRA对子宫颈癌细胞的杀伤作用，并探讨其分子机制，为子宫颈癌的治疗提供理论依据和治疗线索。方法1.体外实验：(1)采用CellTiter96AQueous细胞增殖实验检测不同浓度TSA与ATRA（1μg/mL）联合处理后子宫颈癌HeLa及SiHa细胞生长抑制率。并根据增殖实验结果选择对heLa和SiHa细胞增殖有效抑制的TSA（500nmol/L)浓度，将下一步实验分为四组：对照组、TSA组、 ATRA组、TSA+ATRA组。对照组加入溶媒。(2)7-AAD荧光染色法观察子宫颈癌HeLa及SiHa细胞形态变化及其凋亡情况。(3)采用Western-blot方法检测药物处理后子宫颈癌HeLa及SiHa细胞中STAT3、p-STAT3、P53、P21、caspase-3、BCL-2的表达差异。(4)采用流式细胞术（FCM）检测药物处理后子宫颈癌HeLa及SiHa细胞的凋亡变化。2.体内实验：取人新鲜宫颈癌组织块，移植于CD1nu/nu裸鼠左侧肩胛部皮下，每例接种5只小鼠。此为第1代荷宫颈癌小鼠（下称F1）。当CD1nu/nu裸鼠皮下肿瘤生长至大于1cm3后，剪开皮肤，剥离皮下肿瘤，部分冻存和10%福尔马林固定备用，部分瘤块作为传代移植的组织来源。取20只CD1nu/nu裸鼠，按上述方法，建立第2代荷宫颈癌小鼠（下称F2）。待肿瘤皮下可触及时，分别给予TSA腹腔注射(1mg/kg/d)，ATRA(15mg/kg/d)，单独或者联合用药，每组各5例，对照组给予溶剂处理。治疗时间为4周。(1)每4天用游标卡尺测量肿瘤大小，按照公式：肿瘤体积=（长×宽2）/2计算肿瘤体积并绘制肿瘤生长曲线。(2)28d后处死动物，并将肿瘤组织剥离提取总蛋白，Western-blot方法检测BCl-2、P21、p53及p-STAT3的表达情况结果1.体外实验：(1) CellTiter96AQueous细胞增殖实验结果证实TSA（500nmol/L）时联合ATRA （1ug/ml）对细胞有显著的增殖抑制作用，差异有统计学意义（P<0.05）。(2)7-AAD荧光染色法显示，与对照组比较，经TSA处理后，细胞有典型的凋亡变化，TSA和ATRA联合用药组凋亡细胞明显增加，优于TSA和ATRA单独用药组。(3)流式细胞术结果发现HeLa细胞TSA联合ATRA用药组的细胞凋亡率为16.15%，与对照组2.13%、ATRA组3.97%， TSA组9.19%相比，细胞凋亡率显著增加，组间比较差异有统计学意义（P<0.05)。TSA和ATRA组与对照组比较细胞凋亡率，差异有统计学意义。SiHa细胞TSA联合ATRA用药组的细胞凋亡率为6.36%，与对照组0.38%、ATRA组2.84%， TSA组3.44%相比，细胞凋亡率显著增加，组间比较差异有统计学意义（P<0.05)。TSA和ATRA组与对照组比较细胞凋亡率，差异有统计学意义。(4) Western-blot结果显示，TSA联合ATRA显著提高子宫颈癌HeLa及SiHa细胞中p53、p21以及激活性caspase-3蛋白表达，降低STAT3、p-STAT3及BCL-2蛋白表达水平，差异有统计学意义（P<0.05）。2.体内实验：(1) TSA联合ATRA显著抑制裸鼠瘤生长，与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。(2) Western-blot结果显示，TSA联合ATRA显著提高裸鼠瘤组织中p53及p21表达，降低STAT3、p-STAT3表达水平，差异有统计学意义（P<0.05）。结论（TSA）联合（ATRA）可抑制子宫颈癌HeLa及SiHa细胞的增殖并诱导其细胞凋亡，P21、p53表达的上调及p-STAT3，BCL-2表达的下调可能为其机制之一。