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目的：A类清道夫受体(SR-A)是一类主要表达于巨噬细胞表面的模式识别受体,其活性改变对于巨噬细胞的多种生物学功能都有极大的影响,尤其是能调节巨噬细胞的凋亡和炎症因子的分泌(1,2)。已有研究报道指出,人体脂肪组织SR-A表达水平和胰岛素抵抗的发生密切相关(3),提示SR-A可能在选择性调控胰岛素抵抗过程中发挥重要的作用。本课题同时应用高脂饮食诱导的肥胖和自发性肥胖两种模型,深入探讨了SR-A调节胰岛素敏感性的作用机制。本研究结果有助于发现针对肥胖相关性胰岛素抵抗新的治疗靶点。方法：通过给予6周雄性SR-A+/+和SR-A-/-小鼠高脂饮食15周,建立饮食诱导的胰岛素抵抗模型,同时以普通饮食小鼠作为对照。在造模过程中,监测小鼠的体重、空腹血糖及食物摄取量。15周后,检测4组小鼠的葡萄糖耐量及胰岛素耐量改变,研究SR-A基因缺失对于小鼠胰岛素敏感性的影响。随后,我们应用定量PCR和免疫组化的实验方法,检测附睾脂肪组织中巨噬细胞的浸润情况。接着又通过定量PCR和流式的方法,检测了脂肪组织中浸润巨噬细胞的极化分型情况。此外,我们还提取小鼠脂肪组织蛋白,通过免疫共沉淀和western blot的方法,检测胰岛素受体及其下游信号分子AKT磷酸化激活的变化。为了进一步确定SR-A和胰岛素抵抗之间的关系,我们还将SR-A-/-小鼠和ob/ob小鼠进行杂交,获得SR-A-/-ob/ob小鼠。给予这种小鼠连续8周的正常饮食,建立自发性肥胖模型,同时以SR-A+/+ob/ob小鼠作为对照,重复以上试验。SR-A在诱导巨噬细胞极化分型中的作用及机制研究通过体外试验来进行。在体外分离培养SR-A+/+和SR-A-/-小鼠腹腔巨噬细胞和骨髓源性巨噬细胞后,分别给予IL-4或LPS (M-CSF或GM-CSF)刺激,观察细胞的极性分化情况。结果：在高脂饮食诱导的肥胖模型中,给予小鼠高脂饮食后,其体重、附睾脂肪重、血糖和血胰岛素均较正常饮食组有明显增高。其中,高脂饮食组SR-A-/-小鼠的空腹血糖及血清胰岛素水平明显高于与SR-A+/+小鼠。葡萄糖耐量实验(GTT)和胰岛素耐量实验(ITT)结果显示,SR-A表达缺失会明显降低胰岛素敏感性,增加高脂饮食所造成的胰岛素抵抗。进一步,我们检测了胰岛素受体及其下游信号的磷酸化激活情况。结果显示,高脂饮食组给予胰岛素刺激后,SR-A-/-小鼠脂肪组织胰岛素受体及其下游Akt磷酸化都明显降低。定量PCR和免疫组化实验结果显示,给予高脂饮食后,脂肪组织中巨噬细胞的浸润显著增多,但SR-A+/+和SR-A-/-两组小鼠之间没有明显统计学差异。进一步,为了研究SR-A参与调控胰岛素敏感性的机制,我们通过定量PCR和流式的方法对小鼠脂肪组织中巨噬细胞的极化分型进行了检测,发现给予高脂饮食后,M1型巨噬细胞的分子标记(CD16, CD32, TNFa, iNOS)无明显差异,但M2型巨噬细胞分子标记(Mrc2, Arg1, Yml)显著减少约54.9%-96.9%。流式检测高脂饮食组小鼠脂肪组织巨噬细胞,可见SR-A-/-小鼠F4/80+CDllc-细胞约占15.8%±1.2%,与SR-A+/+小鼠相比减少明显(22.2%±0.4%),有统计学意义。以上结果表明,SR-A可以增加脂肪组织中M2型巨噬细胞的浸润。为了进一步探究SR-A在肥胖所导致的炎症反应和胰岛素抵抗中的作用,随后我们将SR-A-/-和SR-A+/+小鼠分别与ob/ob小鼠进行杂交,建立自发性肥胖模型。SR-A-/-ob/ob小鼠的体重、附睾脂肪重量血糖和血胰岛素都明显高于SR-A+/+ob/ob小鼠。在GTT和ITT的实验中,SR-A-/-ob/ob小鼠的血糖较SR-A+/+ob/ob小鼠显著增高,胰岛素敏感性下降。此外,我们同样发现两组小鼠脂肪组织中巨噬细胞的浸润没有明显差异。但是,SR-A-/-ob/ob小鼠脂肪组织中的M1型巨噬细胞分子标记比SR-A+/+ob/ob小鼠明显增高约1.1-2.7倍,M2型巨噬细胞分子标记显著降低,为SR-A+/+ob/ob小鼠的49.6%-81.1%,差异有统计学意义。这表明在自发性肥胖模型中,SR-A通过增加M2型巨噬细胞的浸润,从而改善胰岛素抵抗。最后,我们通过体外实验研究了SR-A对于巨噬细胞极化分型的影响。体外提取SR-A+/+和SR-A-/-小鼠腹腔巨噬细胞,分别给予LPS和IL-4刺激24h,并提取RNA进行定量PCR检测。结果发现,使用LPS刺激后,SR-A-/-小鼠腹腔巨噬细胞表达M1巨噬细胞标记蛋白(CD32,iNOS,TNFa)相比于SR-A+/+小鼠显著增加(约2.01-2.03倍)；使用IL-4刺激,SR-A-/-小鼠腹腔巨噬细胞表达M2巨噬细胞标记蛋白(Arg1, Mgll, Yml)相比于SR-A+/+小鼠减少51%-95%。进一步提取SR-A+/+和SR-A-/-小鼠骨髓源性巨噬细胞,分别给予M-CSF和GM-CSF刺激,得到了类似的结果,说明SR-A缺陷导致巨噬细胞向M1型分化。结论：在肥胖所诱导的慢性炎症反应和胰岛素抵抗中,SR-A蛋白缺失可以减少脂肪组织中M2型巨噬细胞的极化分型,增加局部组织慢性炎症反应水平,从而降低胰岛素敏感性,增加胰岛素抵抗的发生。