橄榄蛏蚌微卫星标记开发及群体遗传多样性分析

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wxf19860413
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橄榄蛏蚌(Solenaia oleivora)是我国特有的淡水珍稀蚌类,其肉足大、肉味鲜美、营养丰富,具有较高经济价值,但一直遭受无序的过度采捕和利用。近年来,我国橄榄蛏蚌分布区内的自然种群资源急剧衰退,橄榄蛏蚌已成为受威胁的稀有蚌类,亟待找出致危原因并进行保护。本研究以橄榄蛏蚌为研究对象,运用磁珠富集法筛选橄榄蛏蚌微卫星分子标记,采用微卫星标记对橄榄蛏蚌3个群体的遗传多样性进行评价,同时采用形态度量学方法对橄榄蛏蚌3个群体的形态差异进行比较,旨在为橄榄蛏蚌种质资源保护及合理利用提供科学依据。1.橄榄蛏蚌群体的形态学比较测量橄榄蛏蚌成蚌3个群体(湖北天门、安徽阜南和湖北荆州)共244个个体的壳长、壳高、最大壳宽等9个形态学指标。基于8个形态度量比例性状进行主成分分析,构建了3个主成分,其贡献率分别为45.97%、25.62%、10.32%,累积贡献率为81.92%。判别分析显示三个群体(天门、阜南和荆州)的判别准确率依次为78.95%、93.02%、74.60%,综合判别率为82.79%。聚类分析结果显示天门群体与荆州群体先聚为一类后再与阜南群体聚类。2.橄榄蛏蚌微卫星标记的开发和适用性分析运用磁珠富集法开发了橄榄蛏蚌15对二碱基重复微卫星引物和17对三四碱基重复微卫星引物。用生物素标记的(CA)i2、(AAC)8、(GATA)4探针进行磁珠富集,随机挑选475个克隆进行PCR筛选后测序,分析发现107个克隆含有微卫星重复单元。微卫星核心序列碱基重复次数为7到27次,绝大多数序列重复次数大于10。从微卫星两端的侧翼序列设计并获得了32对能够在橄榄蛏蚌基因组扩增有效且具有扩增多态性的微卫星引物(n=46),32对多态引物多态信息含量(PIC)在0.250~0.892之间,平均为0.646;等位基因数在2-15个之间,平均为7.0个;观测杂合度(Ho)介于0.357~0.929之间,平均为0.625;期望杂合度(HE)的变化范围为0.293~0.880,平均为0.726。3.橄榄蛏蚌三个群体遗传多样性和遗传结构的微卫星DNA分析选取15个多态的微卫星位点的引物对橄榄蛏蚌湖北天门、安徽阜南和湖北荆州三个野生群体的遗传多样性和种群遗传结构进行了分析。检测群体是否符合Hardy-Weinberg平衡的状况,统计分析了等位基因数(NA)、有效等位基因(NE)、杂合度、平均多态信息含量(PIC)等遗传参数。结果显示15个微卫星标记位点在3个群体中平均等位基因数(NA)在5.20~7.47之间,平均有效等位基因数(NE)在3.04~4.93之间,平均观察杂合度(Ho)为0.501~0.620,平均期望杂合度(HE)为0.598~0.701,3个群体的平均多态信息含量(PIC)在0.547~0.604之间,全部为高度多态(PIC>0.5). AMOVA分析显示三个群体间存在显著的遗传分化(FST=0.094),群体间的成对固定指数(FST)在0.1733~0.2240之间(P<0.01)。三个群体间的遗传距离为0.1149~0.1965,天门群体和荆州群体遗传距离较近。分析结果表明:橄榄蛏蚌3个群体的遗传多样性处于中等水平,其中阜南群体遗传多样性最高,荆州群体遗传多样性最低。三个群体间存在显著的遗传分化,天门群体和荆州群体亲缘关系较近。
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