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小鼠胚胎早期卵黄囊和AGM区的造血发育显示了造血发生同血管形成密切相关。造血细胞和内皮细胞可能存在共同的前体细胞即成血-血管细胞(hemangiobalst)。ES细胞分化培养2.5-3.5天形成的拟胚体中可检测到blast集落形成细胞(blast colony-forming cell,BL-CFC),后者具有造血和内皮双向分化潜能,体外证明了成血-血管细胞的存在。EBs来源BL-CFC检测成为研究成血-血管细胞的体外模型,为研究转录因子、细胞因子等造血调控因素在成血-血管细胞发育中的作用提供了有效的途径。本实验以建立的blast集落培养体系为基础,研究BL-CFC的造血和内皮分化潜能以及TGF-β1对BL-CFC的产生和blast集落形成的影响。并对高增殖潜能集落形成细胞(high proliferative potential-colony forming cells,HPP-CFC)成血-血管活性进行了初步鉴定。 首先,应用CCE ES细胞系分化培养获得blast集落,巢式RT-PCR方法检测单个集落造血和内皮相关基因的表达,免疫荧光染色证明blast集落来源的贴壁细胞表达CD31、VE-Cadherin/CD144和UEA-I,并可特异性吞噬LDL,证明其为内皮细胞。造血集落培养检测blast集落细胞的造血分化能力,证明BL-CFC不仅可产生包括原始造血和永久造血的多种定向造血祖细胞,而且可产生HPP-CFC,更加丰富了BL-CFC作为成血-血管细胞的功能性定义。 在以上实验的基础上,blast集落培养的不同阶段施加外源性TGF-β1及其中和抗体,研究TGF-β1对BL-CFC的产生及其分化能力的影响。结果发现在EBs培养阶段加入TGF-β1中和抗体EBs中BL-CFC的数量明显减少,而外源性TGF-β1对BL-CFC的产生无显著影响。在blast集落培养阶段外源性TGF-β1则明显抑制blast集落的形成。提示TGF-β1对成血-血管细胞发育的调控作用在成血-血管细胞产生前后有着不同的调控方式和机理。 BL-CFC在培养2.5-4天的EBs中短暂出现后消失,随后HPP-CFC最早产中文摘要生于培养5天的EBs中,BL一CFC消失后ES来源HPP一CFC,甚至胚胎造血细胞来源的HPP一CFC是否会保持成血一血管细胞活性?回答此问题有助于了解成血一血管细胞的发育、迁移和生长。我们取培养7天的EBs以及10dPc小鼠胚胎卵黄囊和AGM区来源的HPP一CFC进行内皮细胞分化诱导和鉴定,结果表明上述来源的部分HPP一CFC产生多向造血细胞的同时具有内皮分化能力,初步证明HPP一CFC具有成血一血管细胞活性。