忍冬叶活性成分分离分析研究

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忍冬是抗炎、止血、解热的常用中药材。也可用于食品、化妆品等行业中。忍冬叶含有与花蕾部分相似的化学成分,部分药理活性可媲美金银花,且在产量、采集方法、价格等方面具有很大优势。本论文以忍冬叶为研究对象,在课题组前期研究工作的基础上,采用传统分离方法对忍冬叶中的抗炎活性成分进行分离纯化,并采用纳米材料作为吸附剂对忍冬叶中的有机酸进行了分离。主要研究内容分为以下两个部分:1.MCI GEL CHP20P柱色谱与Pre-HPLC联用分离纯化忍冬叶抗炎活性成分及其抗炎作用研究以忍冬叶为原料,经索式抽提、加热回流、分级萃取后得到忍冬叶提取液正丁醇相(RDY n-B相)。采用MCI GEL CHP20P柱色谱法对RDY n-B相进行不同极性分离,得到50%甲醇洗脱馏分(M1)。其次采用大鼠足肿胀模型对RDY n-B相及M1的抗炎活性进行评估,使用新鲜鸡蛋清致大鼠足肿胀,以地塞米松为阳性对照,通过测量大鼠足肿胀率,对M1和RDY n-B相的抗炎活性进行研究。结果表明,忍冬叶提取物M1的抗炎效果优于RDY n-B相,和阳性对照组地塞米松相当。研究结果为忍冬叶抗炎活性组分在抗炎药物中的应用提供了理论基础。然后利用Pre-HPLC对该M1组分进行分离制备,采用HPLC-MS、1H NMR、13C NMR、UV-vis及FT-IR等谱学分析手段,对得到的化合物进行解析,得到其中一个未知化合物为5,7,3’,4’-四羟基黄酮-7-O-三叶皂苷(5,7,3’,4’-Tetrahydroxyflavone-7-O-sambubioside),且该化合物为首次从忍冬叶中分离制得。2.ZIF-8对忍冬叶中有机酸类化合物的选择性分离及吸附机理初步研究本部分以ZIF-8为吸附剂,对忍冬叶中有机酸类化合物进行选择性分离并进行吸附机理的初步研究。首先合成了ZIF-8材料,并利用XRD、FT-IR、BET、TGA、TEM及SEM等技术对其进行了表征,证明了该材料的成功合成。然后将ZIF-8作为吸附剂,对忍冬叶中的几种有机酸进行吸附研究。对吸附剂用量、吸附时间、吸附温度、解吸条件等影响因素进行了优化。方法学验证表明,在最佳条件下,6个有机酸化合物在0.12-26μg/m L的浓度范围内线性相关性较好,相关系数R2≥0.9967,且样品的检测限(LODs)较低(0.047-0.093μg/m L)。将ZIF-8应用于忍冬叶乙酸乙酯相(e-a)进行分离富集,结果表明ZIF-8所吸附的化合物主要是有机酸类化合物(新绿原酸、绿原酸、咖啡酸、异绿原酸B,异绿原酸A和异绿原酸C)。并对忍冬叶乙酸乙酯相(e-a)进行三个不同浓度(0.5、5、10μg/m L)的加标,得到平均加标回收率为70.7-107.7%,相对标准偏差为0.89-7.57%。结果表明,ZIF-8对忍冬叶e-a相中所含有机酸具有明显的选择性分离作用。此外,利用密度泛函理论(DFT,Density Functional Theory)、X射线光电子能谱(XPS)和Zeta电位对ZIF-8对有机酸类化合物的吸附机理进行分析,结果表明ZIF-8对有机酸的吸附主要来自表面吸附、氢键作用和静电作用。
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