抗PTEN小鼠源多克隆抗体的制备和检测

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第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白(Phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten,PTEN)基因是一个具有磷酸酶活性的肿瘤抑制基因,位于人类染色体10q23。该基因在正常的组织中广泛表达,例如乳腺、心、肝、肺、肾和脑等。PTEN基因的突变或缺失能够加快细胞增殖,促进细胞的浸润和侵袭,有助于癌细胞的发生和发展,与多种癌症的预后不良关系密切。因此,该基因在临床病理筛查、免疫学等领域迅速成为关注的焦点。然而进口的PTEN抗体价格较高,无形中增加了科研成本,不利于临床上对PTEN基因的普遍筛查和相关研究。  目的:  建立起一套成本低、效率高的抗PTEN小鼠源多克隆抗体制备体系,制备出效价高、特异性好的抗PTEN多克隆抗体,以替代昂贵的进口抗体,为PTEN的相关研究提供便利。  方法:  PCR扩增人类的PTEN基因序列,构建原核表达载体pET28a(+)-PTEN,转化工程菌BL21,IPTG诱导表达目的蛋白PTEN,SDS-PAGE电泳检测目的蛋白的诱导表达结果。使用His-Bind树脂对目的蛋白进行纯化,将纯化后的目的蛋白乳化后制备成蛋白抗原,对BALB/C小鼠进行多点皮下注射,获取小鼠的免疫血清。ELISA间接法检测血清中抗PTEN多克隆抗体的滴度,Western Blot检测多克隆抗体的特异性。  结果:  成功构建了pET28a(+)-PTEN原核表达载体并转化工程菌BL21,IPTG诱导表达后,SDS-PAGE电泳显示在46 kD附近有清晰特异的蛋白条带,与理论预期相符。目的蛋白PTEN经过His-Bind树脂纯化后,纯度达到了90%以上。将其皮下注射免疫 BALB/C小鼠后,ELISA间接法测定小鼠血清中抗体的滴度为1:51200。以制备的多克隆抗体作为一抗进行Western Blot检测,在46 kD附近有清晰特异的免疫印迹条带。这表明已经成功制备出效价较高、特异性较好的鼠抗PTEN多克隆抗体。  结论:  建立了一套低成本的抗PTEN多克隆抗体制备体系,制备出的抗体效价较高,特异性较好,满足常规的实验需求,从一定程度上可以降低PTEN基因的科研成本。
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