HSV-1衣壳蛋白VP23多克隆抗体的制备以及PGG在大鼠体内的药代动力学研究

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目的:构建重组质粒pET-28a(+)-UL18,利用大肠杆菌原核表达系统克隆表达大量VP23,进行纯化并用于制备多克隆抗体,并探索抗HSV-1药物PGG在雌雄大鼠体内的药代动力学参数及口服生物利用度。方法:将UL18基因进行全序列PCR扩增,将PCR产物克隆进pET-28a(+)质粒,最后将重组质粒转化进入原核表达系统E.coli BL21(DE3)中表达出带有6个组氨酸标签的重组VP23蛋白。优化VP23在大肠杆菌中的最佳表达条件,利用其所带组氨酸标签在亲和层析柱上进行纯化,得到的高纯VP23经皮下注射新西兰兔进行多克隆抗体的制备,四次免疫后用ELISA检测抗体的效价。通过对SD大鼠静脉注射和灌胃两种给药方式,在24h内间隔采血,用HPLC分析血药浓度变化,用PKSolver软件求得药代动力学参数,计算生物利用度。结果:成功构建单纯疱疹病毒1型(HSV-1)UL18基因的重组载体,并在原核表达系统表达出其编码的衣壳蛋白VP23且带有组氨酸标签,且进一步优化了VP23在发酵中的最佳表达条件,纯化并大量制备VP23,免疫新西兰兔后得到的抗体具有较高的效价。并且确立了PGG在从血浆中提取以及在HPLC中的分析条件,得到了PGG在大鼠体内经不同给药方式后的药代动力学参数。大鼠静脉注射给药后,药时曲线呈下降趋势,药物药代动力学过程符合二室模型,雌雄大鼠的分布相半衰期为雄性:0.15±0.02h,雌性:0.21±0.03h,小于其消除相半衰期(雄性3.29±0.34h和雌性3.83±0.59h);灌胃给药时,药物在雌雄SD大鼠体内分布后,达峰时间分别为雄性0.08±0.03h和雌性1.00±0.44h,达峰浓度为雄性0.02±0.001μg/mL和雌性0.02±0.0002μg/mL。药物在雄性大鼠体内的生物利用度为2.88%,雌性大鼠为5.20%。结论:得到的VP23抗体为研究PGG等抗HSV-1药物研发提供了可供检测的工具,并结合抗HSV-1药物PGG在体内的药代动力学参数,为研究PGG在体内条件下对HSV-1的抗病毒治疗提供了应用手段和依据。
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