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香辛料是日常膳食和加工食品中常用的呈香物质,所含的挥发油(EO)是一类抗菌性强、抗菌谱广的天然抗菌剂,极具开发潜力。
以六种食源腐败细菌和真菌为对象,对14种香辛料EO抗菌活性进行了初步筛选,结果显示,14种EO对六株测试菌都有一定的抑制作用,顺序为:丁香、肉桂、牛至、百里香>大蒜、藿香>肉豆蔻、艾叶、干姜、荆芥、八角茴香、香茅、薄荷和鱼腥草。14种香辛料滤液对细菌抑制效果不明显,对真菌没有抑制作用。
采用GC和GC/MS测定四种EO的成分及其含量,鉴定出丁香油28个成份,主成分为丁香酚,含量78.11%,第一次发现丁香油中含有a-橙椒烯;肉桂油31个成份,主成分为肉桂醛,含量83.04%,胡椒烯、杜松-4,9-二烯和杜松-3,9-二烯这三个成分第一次发现;牛至油26个成分,主成分为百里香酚和香芹酚,含量分别为37.13%和15.72%,香芹酚含量与报道有很大不同;百里香油27个成份,主成分为百里香酚,含量为30.74%,香芹酚含量与报道有明显差别。
首次采用醛基-亚硫酸氢钠加成法和柱层析法对肉桂挥发油进行分离纯化,肉桂醛含量分别达99.01%和96.04%,得率分别达82%和71%。进一步分析显示,醛基.亚硫酸氢钠加成法适合醛或甲基酮类含量较高的EO,层析法适应范围更广。
比较目前几种抗菌试验方法,发现肉汤稀释.活菌计数法最为准确。基于此方法,以五种微生物为抗菌对象,测定了四种EO及其主成分抗菌活性:肉桂油、牛至油>丁香油>百里香油,百里香酚、香芹酚、肉桂醛>丁香酚;丁香酚、肉桂醛、百里香酚和香芹酚为主要抗菌成分。
从静态角度测定了四种EO成分的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),结果表明,对沙门氏菌的MIC和MBC:肉桂醛>百里香酚、香芹酚>丁香酚,对大肠杆菌的MIC和MBC:百里香酚、香芹酚>肉桂醛>丁香酚。从动态角度测定两株菌的生长曲线和四个EO成分的时间-杀菌曲线,确定了四个EO成分对两株菌的杀菌效果和杀菌时间,为抗菌试验的培养时间、电导率测定提供理论支持。
比较目前几种复配试验方法,发现棋盘法试验设计结合两种结果判断的方法最为准确。基于此方法,研究了四种EO成分之间、四种EO成分与其它协同成分之间的关系,结果表明,四个EO成分两两之间对沙门氏菌,都具有协同抗菌的作用;对大肠杆菌,肉桂醛与百里香酚、肉桂醛与香芹酚组合是相加作用,肉桂醛与丁香酚、百里香酚与香芹酚、百里香酚与丁香酚、香芹酚与丁香酚组合是协同作用;对两株试验菌,四个EO成分与:EDTA-二钠或乙酸都有很强的协同作用,与Naa或柠檬酸较强的协同作用,与乳酸没有协同作用。单一成分对沙门氏菌的抗菌活性强于对大肠杆菌,但当两两复配时,对大肠杆菌的抗菌效果明显强于对沙门氏菌。另外,就大肠杆菌而言,协同性强弱:百里香酚>丁香酚>香芹酚>肉桂醛,协同贡献:丁香酚>百里香酚>香芹酚>肉桂醛。
以细胞膜电压、膜渗透性和电导率等为靶点,采用流式细胞仪等先进仪器,在细胞水平上,对四种EO主成分的抗菌机理进行了初步探索。结果表明:膜电位强弱:丁香酚>百里香酚、香芹酚>肉桂醛,膜渗透性强弱:丁香酚>肉桂醛、百里香酚、香芹酚,电导率强弱:肉桂醛>百里香酚、香芹酚>丁香酚。综合以上测定结果,可初步解释为,这四个EO主成分能够对大肠杆菌的细胞膜产生作用,降低了膜电位和质子运动力量,增强了膜的渗透性,导致胞内离子外泄,从而抑制微生物生长,当达到一定程度时,甚至能杀死微生物。采用热力学、电化学和量子化学等理论,初步探索了EO成份的量效关系。在22个量化、物化和抗菌成分浓度参数中,影响沙门氏菌和大肠杆菌灭菌率最大的参数是抗菌成分浓度,其次是8个物化参数,量化参数没有显示出明显的作用;物化参数对两种菌的影响刚好相反,这可能跟两株菌自身有关。在分析量效关系的基础上构建了EO成份与抗菌效果的数学模型。