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背景：心衰是各种心血管疾病最终的共同转归，严重威胁着人类的健康。传统观念认为，心肌细胞坏死后不能再生，而心肌细胞不可逆转死亡是心衰发病机制中最重要的始动和加速因素之一。尽管传统药物治疗和机械装置的使用发展迅速，但心衰的入院率和病死率仍高居不下，心脏移植又因为供体缺乏而大受限制。近年来，干细胞移植技术在心血管疾病领域的应用为心衰提供了全新的治疗策略，有关利用干细胞再生修复受损心肌的研究在理论上具有诱人的前景。虽然相关基础实验及临床研究比较广泛，但研究结果存在较大争议。细胞移植后的分化问题和改善心功能的机制等问题均不明确。目的：1．快速右室起搏建立心衰模型；2．观察骨髓单个核细胞(bone marrowmononuclear cells，BM-MNCs)悬液的制备及经心肌注射的可行性；3．观察经冠脉移植BM-MNCs对心衰犬心功能的影响；4．观察标记的BM-MNCs能否在心衰心肌内存活并且分化成为心肌样细胞；5．观察BM-MNCs移植后对血管形成的影响及对血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和AKt(丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶B)mRNA表达的影响。方法：1．杂种犬16只，随机分为实验组(n=8)和对照组(n=8)两组，快速右室起搏建立犬心衰模型；2．移植组的实验犬全麻后无菌条件下于髂前／后上嵴抽取骨髓30～40ml，ficoll淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离得到BM-MNCs，CM-DiI标记待移植的BM-MNCs，用倒置相差和荧光显微镜观察细胞数目和标记效率，调整细胞浓度为3×10~7～1×10~8／ml；3．开胸，暴露心脏，向左室心肌分4～5个点注射制备好的BM-MNCs，对照组注射等量生理盐水，术后饲养观察4周；4．所有实验犬于心衰前、建立心衰模型后及移植后4周行血流动力学检查，检测右房、右室、肺动脉及肺动脉毛细血管楔压，并以热稀释法测量心排血量；5．超声心动图检查：所有实验犬于心衰前、建立心衰模型后及移植后4周行超声心动图检查，测量左室舒张末内径、左室收缩末内径、左室舒张末容积、左室收缩末容积和射血分数；6．移植后4周，氯化钾注射法处死犬，取心尖、前壁和室间隔心肌，观察CM-DiI示踪的细胞的分布，免疫荧光染色检测CM-DiI示踪的细胞是否表达心肌细胞特异性蛋白-肌钙蛋白，免疫组化染色计算毛细血管密度；7．RT-PCR检测VEGF、bFGF和AKt的mRNA表达。结果：1．BM-MNCs经CM-DiI标记后，细胞膜着色，紫外光激发呈现红色，标记效率为80％～90％；2．4周后BM-MNCs移植治疗的犬心肌组织均可见到CM-DiI标记的红色细胞，细胞移植组肌钙蛋白的免疫荧光染色均为阳性，呈现绿色荧光，与CM-DiI标记的红色荧光供体细胞进行叠加，可见肌钙蛋白染色双阳性的细胞，呈现黄色荧光；3．实验组与对照组犬心衰模型血流动力学指标差异均无统计学意义(P＞0．05)，4周后实验组较治疗前PAP、PCWP和CO明显改善，差异有统计学意义(PAP，19．86±2．34 vs．16．29±1．90，P＜0．05；PCWP，14．71±3．15 vs．12．29±1．89，P＜0．05；CO，2．66±0．47 vs．2．95±0．40，P＜0．05)。对照组较治疗前血流动力学指标差异均无统计学意义(P＞0．05)。与对照组相比，实验组干细胞移植4周后PAP和CO差异有统计学意义(PAP，16．29±1．90 vs．19．50±2．67，P＜0．05；CO，2．95±0．40 vs．2．41±0．39，P＜0．05)；4．实验组与对照组犬心衰模型各项超声心动指标差异均无统计学意义(P＞0．05)，实验组术后4周时LVEF、SV和LVPWd均较治疗前有明显改善，差异有统计学意义(LVEF，37．29±6．75 vs．42．14±2．79，P＜0．05；SV，9．43±1．90 vs．13．28±1．80，P＜0．01；LVPWd，5．54±1．02 vs．6．12±1．43，P＜0．01)。对照组较治疗前血流动力学指标差异均无统计学意义(P＞0．05)。与对照组相比，实验组干细胞移植4周后LVEF、LVESV和SV差异有统计学意义(LVESV，16．86±2．67 vs．19．83±1．83，P＜0．05；LVEF，42．14±2．79 vs．36．83±4．12，P＜0．05；SV，13．28±1．80 vs．10．17±3．06，P＜0．05)；5．经过骨髓单个核细胞移植后4周，免疫组化染色高倍镜下，实验组的血管数量明显高于对照组(vWF，7．29±2．03 vs．6．04±2．07，P=0．040；a-SMA，13．25±2．88 vs．10．95±3．63，P=0．033)；6．实验组促血管生长因子VEGF和bFGF的mRNA表达水平(2-△△CT)高于对照组，差别具有统计学意义(VEGF，1．06±0．43 vs．0．32±0．18，P=0．000；bFGF，1．25±1．09 vs．0．50±0．53，P=0．040)，Akt的表达也明显高于对照组(1．15±0．55 vs．0．67±0．16，P=0．022)。结论：1．荧光染料CM-DiI标记BM-MNCs细胞效率高，荧光在活体细胞内存在的时间大于4周，可成功示踪移植的BM-MNCs；2．CM-DiI示踪的细胞能在心衰心肌内存活并且分化成为具有心肌细胞特异性标记——肌钙蛋白的心肌样细胞；3．经心肌内注射移植自体骨髓单个核细胞可改善急性心肌梗死后心脏收缩和舒张功能；4．经心肌移植BM-MNCs可以促进血管生成，提高促血管生长因子VEGF和bFGF的mRNA表达水平，此外抗凋亡效应的Akt mRNA表达明显升高。