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背景:胃癌是全球癌症死亡的第二大原因,晚期胃癌转移复发率高。传统手术、放化疗疗效不佳,分子靶向治疗也未取得明显治疗效果。因此,寻找胃癌新的靶点并进行有效干预,对于临床治疗、判断预后及提高患者生存率具有重要意义。RNA结合基序4(RNA-binding motif4,RBM4)是一种剪接因子,具有多种功能,包括参与调节选择性剪接、翻译控制和RNA沉默等。早期研究认为RBM4在白血病细胞中表达上调,近年来研究报道认为RBM4在多种实体肿瘤中表达下调,提示RBM4基因与肿瘤的发生发展密切相关,但具体作用及分子机制仍然不清楚。目的:首先,观察RBM4在胃癌及胃良性病变组织中的表达,并分析RBM4的表达与临床病理因素及预后之间的关系;其次,体内外实验观察RBM4对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭等恶性生物学行为的影响;然后,研究RBM4对胃癌恶性生物学行为影响的分子机制。最终阐明RBM4可作为胃癌新的分子靶点,用于胃癌的分子靶向治疗。方法:1、观察RBM4在胃癌及胃良性病变组织中的表达,并分析RBM4表达与临床病理因素及预后之间的关系。实验方法如下:①免疫组化检测胃组织芯片(tissue microarray,TMA)中RBM4蛋白表达;②qRT-PCR检测25例新鲜术后胃癌组织及癌旁组织标本中RBM4 mRNA表达。2、体内外实验观察RBM4对胃癌增殖、凋亡、迁移及侵袭等恶性生物学行为的影响。利用RBM4过表达慢病毒载体及靶向沉默RBM4载体,进行如下实验:①采用Western Blot、流式细胞术观察RBM4在胃癌细胞中的表达,筛选出RBM4低表达及高表达胃癌细胞株各一株;②CCK-8增殖实验观察RBM4对胃癌细胞增殖的影响;③流式细胞术观察RBM4对胃癌细胞凋亡的影响;④划痕实验与transwell小室迁移实验观察RBM4对胃癌细胞迁移的影响;⑤transwell小室侵袭实验观察RBM4对胃癌细胞侵袭的影响;⑥体内实验观察RBM4对胃癌皮下移植瘤生长的影响。3、研究RBM4对胃癌恶性生物学行为影响的分子机制。实验方法如下:①免疫组化检测胃癌皮下移植瘤组织中p53和Bcl-2蛋白的表达;②Western Blot研究RBM4对胃癌细胞丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)通路蛋白表达的影响。结果:1、胃癌组织中RBM4蛋白阳性表达为43.8%,而胃良性病变组织如慢性胃炎、肠化生、低级别瘤变、高级别瘤变及癌旁组织中的RBM4蛋白阳性表达分别为58.6%、56.0%、54.2%、51.9%及63.1%;相对于癌旁组织,胃癌组织中RBM4 mRNA表达水平下调64.3%。RBM4蛋白表达水平与胃癌组织分化(P<0.001)、淋巴结转移(P=0.026)、TNM状态(P=0.014)及远处转移(P=0.036)之间有显著的相关性。RBM4低或无表达(P<0.001,CI=0.315-0.710)和TNM III及IV期(P<0.001,CI=4.757-11.166)的患者具有更差的总生存期(overall survival,OS)及无病生存期(disease-free survival,DFS)。多因素分析示 RBM4是独立的预后因子。2、正常胃粘膜上皮细胞GES1中RBM4蛋白表达水平为52.9%,胃癌细胞MKN28、HGC27、MKN45、BGC823 及 MGC803 中 RBM4 蛋白表达水平分别为 43.52%、25.37%、20.36%、17.34%及 45.95%。筛选出 BGC823 为 RBM4 低表达胃癌细胞株,MGC803为RBM4高表达胃癌细胞株。RBM4过表达后抑制了 BGC823细胞的增殖能力,RBM4干扰后促进了 MGC803细胞的增殖能力;RBM4过表达后BGC823细胞的凋亡上调431%,RBM4干扰后MGC803细胞的凋亡下调44.5%;划痕实验显示RBM4过表达后BGC823细胞的迁移能力下调71.2%,RBM4干扰后MGC803细胞的迁移能力上调114.3%;transwell小室迁移实验显示RBM4过表达后BGC823细胞的迁移能力下调55.6%,RBM4干扰后MGC803细胞的迁移能力上调95.1%;transwell小室侵袭实验显示RBM4过表达后BGC823细胞的侵袭能力下调51.2%,RBM4干扰后MGC803细胞的侵袭能力上调77.1%。过表达RBM4能够显著抑制裸鼠体内BGC823胃癌细胞皮下移植瘤生长。3、RBM4过表达的胃癌皮下移植瘤组织中p53蛋白的表达水平上调680%,而Bcl-2蛋白的表达水平下调86.7%。RBM4过表达后BGC823细胞中的p-ERK1/2、p-JNK和p-p38蛋白表达水平分别下调66%、20%、48%,RBM4干扰后MGC803细胞中的p-ERK1/2、p-JNK和p-p38蛋白表达水平分别上调225%、55%、193%。结论:RBM4在胃癌组织中的表达水平下调,RBM4表达的下调与胃癌组织分化、淋巴结转移、TNM状态、远处转移及不良预后密切相关。RBM4能够抑制胃癌细胞的增殖、迁移与侵袭,同时促进胃癌细胞凋亡,抑制胃癌皮下移植瘤的生长。RBM4可能通过p53/Bcl-2及MAPK依赖的通路影响胃癌细胞的恶性生物学行为。本文研究结果提示,RBM4有望成为临床靶向治疗胃癌的一个新靶点。