应用免疫胶体金技术对猪旋毛虫病诊断方法的研究

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旋毛虫病是由旋毛虫引起的一种世界分布的人兽共患寄生虫病。旋毛虫病不仅给人类身体健康带来严重威胁,同时也给养猪业、肉食品加工业、外贸出口等行业造成巨大的经济损失。据资料报导,我国绝大部分省市均有旋毛虫病发病的病例,猪旋毛虫高感染地区为河南省、湖北省和云南省等地,感染率为13%,犬旋毛虫高感染区是东北,检出率为20-40%。我国多个省、市、自治区有人体旋毛虫病流行,其中个别地区人体旋毛虫检出率达2.3%。人患旋毛虫病,若不及时诊断和治疗,患者死亡率可达30%。我省原是猪旋毛虫低感染地区,90年代后,随着市场经济的发展,动物和未经检疫的肉品跨区域流动更加频繁,造成旋毛虫病病原的扩散,使其流行范围进一步扩大,近年来我省部分地区也有猪旋毛虫病发生。目前,国内用于猪旋毛虫病检疫依然采用压片镜检法为主,检出率只有50%左右。由于检出率我国出口的猪肉时有发生被检验出旋毛虫而被退回时的情况,给我国的经济造成了严重的损失。因此,建立特异性强、敏感性高、简便快速的适合生猪屠宰检疫的猪旋毛虫病诊断方法,在实际生产中是非常急需和必要的。本研究应用一种特异性强、敏感性高、简便、快速、成本低、易于现场应用的免疫学诊断方法。利用亲和层析技术提纯旋毛虫ES抗原,建立胶体金快速诊断方法。首先将猪旋毛虫通过小鼠保种传代收集虫体,制备粗抗原(CWE),通过体外培养制备排泄(ES)分泌抗原,对两种抗原进行分析,ES抗原在特异性和敏感性都优于粗抗原,因此将ES抗原为诊断抗原,可提高诊断方法的特异性和敏感性。然后将免疫层析原理和胶体金标记技术应用于本诊断中,应用柠檬酸三钠还原法,将氯金酸溶液还原成胶体金颗粒,在弱碱条件下,与旋毛虫ES抗原结合,形成稳定的旋毛虫ES抗原蛋白标记物,通过将蛋白标记物均匀玻璃棉上,在AE98NC膜上标记兔抗猪作为检测带和抗ES抗体作为对照带等一系列工艺制程猪旋毛虫病诊断试纸条。分别对38份猪旋毛虫阳性血清,33份猪蛔虫、21份猪细颈囊尾蚴、26份猪囊虫阳性血清和98份猪旋毛虫阴性血清进行检测,进行敏感性、特异性、重复性、保存期试验和与ELISA法检测进行对比试验,结果表明试纸条敏感性为97.38%,特异性为98.88%,重复性为100%,纸条检测结果与ELISA检测结果或低1-2个滴度,试纸条检测抗体滴度最高1:6400。因此,在临床诊断中我们可以将血清稀释20倍,全血稀释10倍后用试纸条检测。为今后能够临床应用现场屠宰检验猪旋毛虫病提供了简单、准确和快速的检验方法。通过试验证明,试纸条能够诊断猪旋毛虫病,并且敏感性高,特异性强,重复性好,反应时间短,诊断效率高,成本低,操作简便,判定结果容易,便于推广应用,是目前诊断猪旋毛虫病的有效手段。
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