【摘 要】
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大肠癌(colorectal cancer,CRC)是严重威胁人类健康的主要肿瘤之一,其发病率呈逐年上升趋势。随着分子生物学研究的不断深入,肿瘤确认为一种基因病,癌基因的激活与抑癌基因的
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大肠癌(colorectal cancer,CRC)是严重威胁人类健康的主要肿瘤之一,其发病率呈逐年上升趋势。随着分子生物学研究的不断深入,肿瘤确认为一种基因病,癌基因的激活与抑癌基因的失活是其发生发展的内在本质。随着后基因组时代的到来,国内外应用具有高度并行性、高通量、微型化和自动化特色的基因芯片技术对大肠癌基因表达谱进行了较多研究,使大肠癌相关基因数据库不断丰富。然而,这些研究仅限于基因表达谱数据的挖掘,对筛得的大肠癌相关基因尚缺乏后续的研究报道,未形成系统性研究。 本课题是许红民等“不同分化程度大肠癌的基因表达谱分析”课题的延伸。许红民等首次应用美国Affymetrix公司制备的HG-U133原位合成寡核苷酸芯片(含迄今所知的人类全基因共计32264个,包括19308个已知的人类基因和12956个EST簇)技术,以相应正常大肠粘膜组织为对照,对不同分化程度大肠癌组织进行基因水平系列研究,筛查得到17个最重要的大肠癌相关基因&ESTs。本研究在此基础上,应用文献轮廓生物信息学分析方法对这17个大肠癌相关基因&ESTs行进一步分析,从中确定了一个本课题组首选研究的大肠癌相关基因Nrf3(NF-E2-related factor 3)。 为明确Nrf3基因在大肠癌发生、发展中所起的作用,本研究采用以下实验方法和步骤进行了系列研究:①应用RT-PCR方法验证Nrf3基因芯片检测结果,并从大肠癌组织中钓取Nrf3基因cDNA全长序列;②Nrf3 cDNA全长序列通过Sal Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后,克隆到带有绿色荧光的真核表达载体pEGFP-N1中,构建Nrf3与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的融合蛋白真核表达载体pEGFP-N1-Nrf3;③以脂质体介导,将真核表达载体pEGFP-N1-Nrf3转染到大肠癌LoVo细胞系中,采用流式细胞术(flow cytometer,FCM)观察其在体外对大肠癌LoVo细胞系细胞周期和凋亡的影响;④采用荧光显微镜观察Nrf3的亚细胞定位;③同时为证实Nrf3是否为“特异”,作用于大肠癌的基因,将其转染到肝癌SMMC7721细胞系,以同样方法进行了观察。 本课题的研究结果如下: 1、文献轮廓分析,未见Nrf3、GEMIN6、STAB1和CR2基因与大肠癌相关的研究报道。鉴于,Nrf3基因与分化相关,具备可能参与癌基因或抑癌基因转
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