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禽网状内皮组织增生病(ReticuLoendotheliosis, RE)是由禽网内状皮组织增生病病毒(ReticuLoendotheliosis Virus, REV)引起禽类发生的以淋巴网状细胞增生为特征的肿瘤性病理综合征。REV在我国家禽中的感染率已达30%左右,REV感染不仅能引起肿瘤,还可以引起胸腺、法氏囊等免疫器官萎缩,导致免疫功能下降、甚至免疫抑制,并且极易继发感染其他病毒病和细菌病。REV一旦污染生物制品后,可以导致REV大面积人工传播,给养禽业造成严重的经济损失。因为REV感染鸡群无明显症状和病变,因此REV的检测显得尤为重要。本文首先以禽网状内皮组织增殖症病毒的cDNA建立了PCR检测方法。是以全病毒感染为基础所建立的检测方法。在REV的3个基因上设计了3种特异引物,能特异性的检测REV样品,最低检测限度为104拷贝/uL。PCR检测方法不与其他禽病病原发生交叉反应,重复性和稳定性好。其次以REV的LTR和gag基因的保守区域各设计并合成一对引物,建立SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测方法(Real-time PCR)。以pMD-18T-LTR (p-LTR), pMD-18T-gag (p-gag)重组质粒为标准品建立标准曲线,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行评价。结果表明,该方法线性关系良好；敏感性能检测到10拷贝标准品：能特异性检测REV样品,不与其它禽相关病原发生交叉反应；板内、板间重复试验的变异系数均低于3%。应用该方法对人工感染REV的鸡的心,肝,脾,肺,肾,盲肠扁桃体,腺胃和法氏囊进行初步检测,结果显示法式囊中的含量最高。本研究建立的SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR方法为REV的快速检测、分子流行病学调查以及监测REV污染疫苗情况提供新方法。用禽网状内皮组织增殖症病毒gp90全长蛋白建立了ELISA方法,确定的包被抗原浓度为1μg/mL,被检血清的稀释度为1：400。用禽网状内皮组织增殖症病毒gp90全长蛋白所建立ELISA方法特异性良好;得到间接ELISA判定标准：S/P值≥0.428者判定为阳性,S/P≤<0.349者判定为阴性,介于两者之间判定为可疑。板内、板间变异系数均小于7%,说明此检测方法重复性较好。与同类商品化试剂盒的对比的符合率为93.5%。表明本检测方法可靠,可用于REV感染的血清学调查。PCR检测方法可以作为REV流行病学调查的一种方法,应用范围广,可进行大批量检测。SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法克服了常规PCR因灵敏度不够而导致假阴性的不足,为REV的检测、临床诊断及分子流行病学调查提供了有价值的方法。间接ELISA检测方法不仅适用于临床标本的检测,而且由于检测样品量大,也适合于血清流行病学调查,是一种早期诊断的良好方法。本检测方法为REV的流行病学调查,疫苗检测提供准确快捷的条件。