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禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)是家禽的重要病原之一,其感染可引起鸡和火鸡的病毒性关节炎、腱鞘炎等,并引起免疫抑制,给养禽业造成重大的经济损失。本实验室前期已证实ARV感染能够在体外诱导细胞自噬的产生,且自噬有利于病毒的复制,并与ARV的致病机制有关。但是,ARV感染在体内是否也能够诱导细胞自噬及影响病毒的复制,还需要进一步验证。微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3, LC3/Atg8)是自噬体膜上的标记性蛋白,其表达水平在某种程度上反映了自噬的程度。本研究首先用ARVGX/2010/1毒株感染1日龄SPF鸡,并设立空白及阳性对照组,采集组织器官进行LC3蛋白检测,评价ARV感染能否诱导体内细胞自噬。结果显示,ARV感染SPF鸡48h后,即在心脏、肝脏、脾脏、肾脏、盲肠、法氏囊、胸腺等组织器官内出现了LC3-I向LC3-Ⅱ的转化,且心脏、盲肠、法氏囊的变化最为明显。进一步用透射电子显微镜观察ARV感染鸡的心脏、盲肠和法氏囊,可发现变性的线粒体和典型自噬体等超微结构的存在。上述结果说明ARV感染能够在SPF鸡体内诱导细胞自噬的发生。用ARVGX/2010/1毒株感染1日龄SPF鸡,分别于感染48h、72h、96h和120h后采取心脏、盲肠和法氏囊进行LC3蛋白检测,结果显示,感染鸡的心脏、盲肠和法氏囊中LC3-Ⅱ蛋白的表达水平随着时间的增加而增加,在72h或96h时达到高峰,96h后则递减。随后,将采取的心脏、盲肠以及法氏囊等组织处理后感染CEF细胞,用TCID50方法进行病毒滴度的检测,结果显示,心脏、盲肠和法氏囊均在72h时病毒复制水平达到高峰,96h后病毒复制水平则逐渐降低,说明ARV感染SPF鸡后诱导的自噬与病毒复制水平之间具有一定的时间依赖性,LC3-Ⅱ的表达水平和病毒复制水平均在病毒感染后72h或96h内显著升高。进一步证明,ARV感染不仅能够在鸡体内诱导自噬的发生,且能利用ARV感染触发的短暂自噬在体内进行病毒的复制与扩散,使得病毒复制水平在短时间内得到提高。本研究使用自噬抑制剂氯喹(CQ)对1日龄SPF鸡预处理后,接种ARV GX/2010/1毒株,采集心脏、盲肠和法氏囊进行LC3蛋白检测及病毒滴度的测定。结果显示,ARV感染鸡心脏内LC3-Ⅱ蛋白累积明显,而盲肠和法氏囊内LC3-Ⅱ蛋白也有所累积,表明CQ能够抑制ARV感染诱导的细胞自噬。进一步将心脏、盲肠和法氏囊处理后感染CEF细胞,用TCID50方法检测病毒滴度,结果显示,使用CQ能抑制心脏和盲肠内ARV的复制,但在法氏囊中这种现象并不明显,说明CQ能够在抑制细胞自噬的基础上抑制心脏和盲肠内的病毒复制。总之,本研究证明ARV GX/2010/1毒株感染1日龄SPF鸡后能够在体内诱导自噬的发生,但这种自噬现象是短期的,且自噬水平与病毒的复制具有一定的时间依赖性；ARV能够利用机体的短期自噬使得病毒滴度得到短暂的升高；使用自噬抑制剂CQ能够导致组织器官细胞内LC3-Ⅱ蛋白的累积,并能使得病毒复制水平略有降低。