前言：骨肉瘤是最常见的原发性恶性骨肿瘤之一,目前采用手术、新辅助化疗等综合治疗方案后,仍有30%-40%的骨肉瘤患者发生远处转移,免疫治疗是继手术、化疗之后,治疗骨肉瘤的手段之一。在目前研究的免疫治疗方法中,CD8+CTL细胞及经典CD3-NK细胞,如肿瘤浸润淋巴细胞,细胞因子诱导的杀伤细胞等治疗骨肉瘤的效果较差,因而在较长一段时间内,免疫过继治疗的基础及临床研究处于相对停滞状态,而γδT细胞作为新的具有特异性抗肿瘤活性的免疫细胞,在抗肿瘤方面的潜在作用逐渐为人们所重视。以往认为γδT细胞为一类不成熟的T细胞,其功能可能与坏死组织的清除有关。但越来越多的研究表明,γδT细胞具有与CTL及NK细胞相似的杀伤肿瘤细胞及病毒感染细胞的功能,因而在免疫监视功能中发挥了极为重要的作用。研究发现γδT细胞对多发性骨髓瘤、黑色素瘤具有明显的抗肿瘤作用；γδT细胞在体内的增殖后,能够大量浸润至转移性肾脏肿瘤中,灭杀和清除肿瘤细胞。更为有意义的是,研究证明在人体外增殖后的γδT细胞对骨肉瘤细胞系具有一定的抑制作用。但迄今为止,γδT细胞在体内外如何杀灭骨肉瘤细胞及其具体的作用机制未见报道。目的：探讨骨肉瘤患者与正常人外周血单个核细胞中γδT细胞比例的差异以及γδT细胞对骨肉瘤细胞的杀伤作用及其可能的分子机制。方法：通过密度梯度离心法从10例骨肉瘤患者、5例骨肉瘤肺转移患者和10例正常人外周血中分离出单个核细胞后,应用流式细胞仪检测γδT细胞所占的比例。外周血中分离出的单个核细胞在体外经唑来膦酸刺激后,用含白介素-2培养基培养14天,再次用流式细胞仪测定γδT细胞的比例。按一定效靶比将γδT细胞和骨肉瘤细胞(MG63, U20S, SAOS)体外混合培养4小时后,用乳酸脱氢酶释放法检测γδT细胞对骨肉瘤细胞的杀伤作用。并用抗人NKG2D抗体和抗人TCR-γδ-PE抗体阻断γδT细胞相关通路后,再次测定γδT细胞对骨肉瘤细胞的杀伤作用。最后用ELISA法检测γδT细胞和骨肉瘤细胞(按效靶比1：20)混合培养8、12、24、48、72后上清液中IFN-γ和TNF-α的含量。统计学处理用SPSS15.0软件完成,计量资料数据表示方式以平均值±标准差(Mean±SD),组间计量资料采用非独立样本t检验。P<0.05为差异有统计学显著性意义。结果：骨肉瘤患者组和骨肉瘤肺转移患者组外周血单个核细胞中γδT细胞的比例显著低于正常组。外周血中分离出单个核细胞在体外经唑来膦酸刺激后,用含白介素-2的培养基中,培养14天,γδT细胞的比例能达到95%以上,且各组之间γδT细胞的比例无明显差异。γδT细胞对不同骨肉瘤细胞系都有明显的杀伤作用,在体外骨肉瘤患者的γδT细胞对骨肉瘤细胞的杀伤作用与正常人无明显差异。用抗人NKG2D和抗人TCR-γδ-PE抗体分别阻断γδT细胞的相关途径后,发现γδT细胞对骨肉瘤细胞的杀伤作用减弱。γδT细胞和骨肉瘤细胞(按效靶比1：20)混合培养24小时后,测得上清液中IFN-γ的含量明显增加,而TNF-α则增加不明显。结论：骨肉瘤患者组及骨肉瘤肺转移患者组外周血单个核细胞中γδT细胞的比例明显低于正常组,可能与在骨肉瘤患者体内γδT细胞的增殖功能受到抑制相关；在体外γδT细胞对骨肉瘤细胞有较强免疫杀伤作用,且骨肉瘤患者与正常人无明显差异,其机制与γδT细胞表面NKG2D和TCR-γδ受体介导的信号通路相关。