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本研究体外分离培养山羊瘤胃上皮细胞,并从细胞与分子水平探讨L-茶氨酸对断奶山羊瘤胃黏膜上皮细胞抗氧化应激的影响,进而为揭示L-茶氨酸缓解H2O2损伤山羊瘤胃上皮细胞的作用机理提供理论依据。试验一湘东黑山羊瘤胃上皮细胞体外分离培养本实验旨在为体外分离培养山羊瘤胃上皮细胞,并对其进行免疫组化鉴定。试验采用42日龄湘东黑山羊瘤胃上皮组织,通过0.25%Trypsin+0.02%EDTA消化,得到大量的山羊瘤胃上皮原代细胞,并进行体外培养。首先,通过倒置显微镜观察原代和传代山羊瘤胃上皮细胞形态;其次,检测山羊瘤胃上皮传代细胞的生长活性,采用的是细胞计数的方法;最后,鉴定山羊瘤胃上皮传代细胞,选用的是免疫组化学的方式。结果发现:1)山羊瘤胃上皮原代细胞经过0.25%Trypsin+0.02%EDTA消化后,贴壁生长需1d时间,呈典型的"波峰”状快速生长需2d的时间,对数期为3-7d,平台期为7-8d,衰退期为8-9d后;2)免疫细胞化学方法鉴定结果显示,呈黄褐色为细胞胞浆,说明呈阳性（CK19）表达为细胞角蛋白19。上述结果说明,山羊瘤胃上皮细胞经过0.25%Trypsin+0.02%EDTA消化后,成功的获得生长活性正常的传代细胞,为后续研究山羊瘤胃上皮细胞作用机理与相关功能奠定初步基础。试验二L-茶氨酸对山羊瘤胃黏膜上皮细胞生长和凋亡率的影响本研究旨为建立双氧水（hydrogen peroxide,H2O2）对湘东断奶黑山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡模型,和研究L-茶氨酸（L-theanine）对H2O2诱导山羊瘤胃黏膜上皮传代细胞凋亡比率及其凋亡通路关键基因表达量的影响。选取42日龄湘东黑山羊的瘤胃上皮传代细胞,分别用MTT法检测细胞存活率、测定细胞周期[概述细胞培养过程],使用流式细胞术（flow Cytometry,FCM）来检测山羊瘤胃上皮传代细胞的凋亡比率。在含有5%FBS的DMEM/F12培养基中培养山羊瘤胃上皮细胞,等待细胞成长的密度达到了60-70%时,分为五组,每组进行三个重复,分为对照组添加0、Ⅰ组800μmol/L H2O2、Ⅱ组4mmol/L L-茶氨酸+800μmol/L H2O2、Ⅲ组8mmol/L L-茶氨酸+800μmol/L H2O2和Ⅳ组16mmol/L L-茶氨酸+800μmol/L H2O2。结果体现:（1）L-茶氨酸能够提高被H2O2损伤的瘤胃上皮细胞的存活率,还能增加S期细胞比例,降低山羊瘤胃上皮细胞的凋亡;（2）使用膜联蛋白-V和碘化丙啶联合染色结果表现:与对照组相比较,添加L-茶氨酸各组晚期细胞凋亡显著降低（P<0.01）,且晚期细胞凋亡比率随L-茶氨酸添加浓度的增加逐渐降低。试验结果表明,L-茶氨酸显著降低晚期细胞凋亡率,说明L-茶氨酸对氧化应激造成的瘤胃上皮传代细胞的损伤具有显著的缓解作用。试验三L-茶氨酸对山羊瘤胃黏膜上皮细胞凋亡关键基因和蛋白表达的影响研究L-茶氨酸对瘤胃上皮细胞损伤的保护作用和机制。使用H2O2诱导的山羊瘤胃上皮细胞细胞损伤模型,选用实时荧光定量PCR（real time polymerase chain reareaction,RT-PCR）对山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡关键基因:[半胱氨酸天冬氨酸-3（cysteinyl aspartate-specific proteinase-3,caspase-3）、半胱氨酸天冬氨酸-8（cysteinyl aspartate-specific proteinase-8,caspase-8）、半胱氨酸天冬氨酸-9（cysteinyl aspartate-specific proteinase-9,caspase-9）、Fas相关死亡域蛋白（fas-associate with death domain protein,FADD）、凋亡酶激活因子（apoptotic protease activating facter-1,apaf-1）]、Bax和Bcl-2表达量进行检测。Western blot法检测Bax和Bcl-2基因和蛋白表达及Bax/Bcl-2比值的转变,评估L-茶氨酸是不是能够保护H2O2诱导的瘤胃上皮细胞损伤。实验表明,（1）使用RT-PCR检测结果显示:与对照组相比,L-茶氨酸添加组caspase-3、caspase-9、apaf-1基因表达量皆显著降低（P<0.05）;（2）L-茶氨酸通过Bax/Bcl-2比值的提高从而发挥抗凋亡的功能。L-茶氨酸对山羊瘤胃上皮细胞损伤有一定的医治以及保护功能。