【摘 要】
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目的:建立可靠的人支气管上皮细胞原代培养方法及鉴定技术。方法:手术切除的新鲜肺组织,去除支气管外的其他组织,保留主支气管和小的支气管,使用PBS液充分冲洗后,去除多次的
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目的:建立可靠的人支气管上皮细胞原代培养方法及鉴定技术。方法:手术切除的新鲜肺组织,去除支气管外的其他组织,保留主支气管和小的支气管,使用PBS液充分冲洗后,去除多次的连接组织和淋巴结,只保留气管软组织,并剪成1×1cm大小的碎片,加入含蛋白酶XIV的消化液中,4℃过夜消化,收集细胞悬液,接种在包被好TypeI/III胶原的培养瓶中,无血清培养基进行原代培养。通过倒置显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行鉴定。结果:1.蛋白酶XIV消化分离支气管上皮细胞可获得较多单个支气管上皮细胞,HE染色可见纤毛细胞、基细胞。2.分离的支气管上皮细胞在无血清培养基中生长良好,1天后细胞逐渐贴壁,细胞小,分布均匀,多成圆形;3-4天后细胞开始逐渐变大、呈多边形;7-10天生长旺盛,可见成片的扁平状、多边形,呈铺路鹅卵石样分布生长。10天后生长缓慢、停止生长,细胞逐渐老化,出现空泡。3.兔抗人的角蛋白8单克隆抗体鉴定原代培养的细胞,胞浆呈棕黄色着色。结论:1.蛋白酶XIV低温过夜消化可获得的较多单个支气管上皮细胞。2.无血清培养基可提供满意的支气管上皮细胞生长条件,提高细胞纯度。3.角蛋白8单克隆抗体免疫组化染色可简单有效的鉴定支气管上皮细胞。
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