实验目的：　　本研究通过建立SD大鼠梗阻性黄疸模型及胆道梗阻再通模型，探讨胆道梗阻后大鼠肝组织中PERK的表达变化，以及梗阻性黄疸再通术后PERK表达变化与中药茵陈蒿汤对肝脏的保护作用，为围手术期清热利湿中药在临床上的合理应用提供理论基础。　　实验方法：　　选择128只成年雄性SD大鼠，体重(270-300)g，动物级别为清洁级，随机分为四组：①梗阻性黄疸组(O组)32只；②假手术对照组(S组)32只；③梗阻性黄疸再通模型+中药灌胃组组(ORC)32只；④梗阻性黄疸再通模型+生理盐水灌胃组(ORW组)32只。S组仅行手术探查、分离胆管，但不予胆管结扎，O组先行手术探查、分离胆管，然后采用双重线结扎法建立梗阻性黄疸模型，两组均于术后1d、3d、5d、7d[1]，每个时相点处死大鼠8只；ORW组、ORC组借鉴本课题之前造模方法建立胆汁体外引流模型[2]行体外胆道梗阻，并于梗阻后第7天解除梗阻，ORW组、ORC组均于梗阻解除后1d、3d、5d、7d每个时相点处死大鼠8只。留取血液标本：检测比较各组动物血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)指标含量；留取少量肝脏组织标本置于-80℃冰箱保存，应用蛋白质印迹法(western blot)测定肝组织中PERK蛋白表达变化，应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测大鼠肝组织PERK基因表达情况；剩余肝组织固定于5％中性福尔马林溶液中，应用免疫组化检测肝组织中PERK蛋白的表达情况，应用HE染色法观察肝组织细胞水平的病理变化。　　实验结果：　　1.生化指标：S组：术后第1天时AST、ALT少量升高，但是都处于正常范围，差异无统计学意义；以S组为对照组，O组术后第1天AST、ALT迅速增高，提示胆总管双重结扎法致梗阻性黄疸大鼠模型造模成功；其中AST、ALT均于术后第1天达到峰值，然后开始下降，自第5天起维持在较高水平，差异有统计学意义（P＜0.05）。ORW组及ORC组解除梗阻后AST、ALT均呈下降趋势；以ORW组为对照，ORC组AST水平在给完中药后第3、5天数值均低于ORW组，下降趋势表现更加明显(P<0.05)，直至两组恢复大致正常水平；ORC组的ALT水平在第1、3天数值均低于ORW组，下降趋势也更加明显(P<0.05)，直至两组恢复大致正常水平。S组术后TBIL、DBIL均无明显变化，差异无统计学意义；与S组比较，O组梗阻后TBIL、DBIL均呈增高趋势，并于第5、7天后趋于稳定(P<0.05)。ORW组及ORC组自解除梗阻后TBIL、DBIL均呈下降趋势；以ORW组为对照组，ORC组的下降趋势更加明显(P<0.05)。　　2.肝组织病理：S组肝细胞形态正常，细胞索排列整齐，未见炎性细胞浸润，显示正常肝小叶结构；O组胆管结扎后第1天可见汇管区、肝血窦内有淤胆现象，伴少量炎细胞浸润，第3天可以发现细小胆管增生，第7天可见肝细胞的坏死灶。解除梗阻后，ORC组及ORW组自第3天起，肝细胞变性坏死灶减少，肝组织内炎性细胞含量逐渐减少，纤维组织细胞增生减轻；ORC组肝细胞在病理学改变优于ORW组。　　3.采用western blot检测肝组织中PERK：在蛋白表达水平上，以 GAPDH为内参，S组术后PERK表达不明显，差异无统计学意义；以S组为对照组，O组PERK的表达量缓慢升高，各时相点均出现明显差异(P<0.05)。解除梗阻后， ORC组及ORW组PERK蛋白的表达量整体上均呈下降趋势(P<0.05)，并于第7天时达到最低点；以ORW组为对照组，ORC组PERK的表达量与之比较，各时相点均出现明显差异(P<0.05)，ORC组PERK表达水平低于ORW组。　　4.免疫组化检测肝组织PERK的表达：镜下可见S组大鼠肝脏内表达较少的PERK。与S组相比，随着造模时间的延长，O组PERK阳性表达量逐渐增加(P<0.05)，主要在细胞核表达，细胞浆少量表达。梗阻解除后，ORW组及ORC组PERK蛋白的表达水平整体上均有下降，并于第7天时达到最低；以ORW组为对照组，ORC组PERK的表达量各时相点均低于ORW组(P<0.05)。　　5、R-T PCR检测大鼠肝细胞中PERK基因：S组PERK mRNA表达水平随造模时间加长无明显变化，一直处于低位水平，差异无统计学意义。O组PERK mRNA表达水平随造模时间加长升高；以S组为对照组，O组PERK mRNA表达水平在各个时相点均高于S组，差异有统计学意义（P<0.05）。解除梗阻后， ORC组及ORW组PERK mRNA的表达水平整体上均呈现下降趋势，并于第7天时达到最低点；以ORW组为对照组，ORC组PERK mRNA的表达水平在各时相点均表现明显差异(P<0.05)，ORC组PERK mRNA表达水平低于ORW组。　　结论：　　1.当梗阻性黄疸时，随着造模时间的延长，PERK及PERK mRNA表达水平呈逐渐增加趋势，且 PERK的表达水平的变化与梗阻性黄疸及胆道再通术后黄疸程度的高低有显著的相关性，这表明在梗阻性黄疸大鼠模型中，存在PERK介导的ERS和细胞凋亡，且凋亡指数与黄疸水平的高低显著相关。　　2.梗阻性黄疸大鼠模型解除梗阻后给予中药茵陈蒿汤可以调节PERK mRNA的表达，进而减少因PERK高度表达引起的肝细胞损伤，改善肝脏因梗阻引起的肝功能异常。梗阻性黄疸时肝损伤程度与 PERK基因表达水平具有相关性，表明梗阻性黄疸时PERK参与了ERS介导的肝细胞凋亡。　　3．针对临床上梗阻性黄疸患者的围手术期治疗，合理的手术方式结合辩证的选取清热利湿中药（茵陈蒿汤）作为辅助疗法，可以更好的降低相关并发症发生率，提高临床治疗效果，促进术后患者的早期恢复。