猪圆环病毒2型(PCV-2)与猪群中发生的多种疾病相关，包括断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎肾病综合征(PDNS)、A2型先天性震颤(CT)、猪呼吸道病复合征(PRDC)等。其中以PMWS最为严重，已经给全世界养猪业带来了很大的经济损失，国内也未能幸免。目前，国内还没有有效的检测试剂盒。快速、特异的检测方法已成为迫切需要。PCV-2的Cap蛋白为病毒的主要结构蛋白，由病毒基因组中ORF2编码，构成病毒的核衣壳，具有较强的免疫原性，基因序列保守，可应用于临床诊断。本研究则从以下两方面研究Cap蛋白，旨在建立PCV-2检测方法，为诊断与该病毒相关性疾病奠定基础。 1 原核系统表达： 用PK-15细胞增殖PCV-2病毒，提取病毒核酸，用PCR方法扩增Cap蛋白全基因，克隆到pET-32a载体中，构建了表达载体pETORF2，转化入大肠杆菌BL21中，用IPTG进行诱导表达，结果显示表达的蛋白大小与设计不符。同样的方法，又构建了表达载体pETRF2，含有Cap蛋白的部分基因，结果显示表达的蛋白大小依然与设计不符。对Cap蛋白编码基因进行分析，发现上面存在大量的精氨酸稀有密码子(AGG／AGA)，它们引起翻译障碍，使得Cap蛋白不能表达。对Cap蛋白基因进行改造，在不改变原氨基酸序列的基础上，把其编码密码子全部换成大肠杆菌偏爱密码子，根据此序列，设计了4条长引物，参照SOE的原理，用降落PCR的方法扩增出含Cap蛋白表位基因的片段，并克隆到pET-32a载体中，成功构建了重组表达载体pETP1P4。SDS-PAGE电泳结果表明，表达的蛋白分子量与设计相符。 2 真核系统表达： 从PK-15细胞(接种有PCV-2)中提取病毒核酸，用PCR的方法扩增出Cap蛋白基因，将其克隆入pSecTag2真核表达载体中，构建了pSecORF2载体。再一次用PCR的方法，以pSecORF2重组质粒为模板，扩增出含有载体分泌信号肽序列的Cap蛋白基因，将其克隆到pIREShyg载体上，构建了pIRESiORF2真核表达载体。然后通过磷酸钙法转染CHO细胞，用潮霉素B进行筛选，经PCR及间接免疫荧光(IFA)鉴定，获得一株能稳定表达Cap蛋白的细胞株。从而为建立以Cap蛋白为基础的检测方法奠定了基础。