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第一部分ICSI后未受精人卵母细胞的人工辅助激活研究目的分别采用乙醇、乙醇+6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)、离子霉素、离子霉素+6-DMAP、6-DMAP五种激活方法激活处理行卵胞浆内单精子注射(ICSI)后24h未受精人卵母细胞,观察和比较几种不同的人工辅助激活方法对行ICSI后24h未受精人卵母细胞的激活作用及效果。方法收集ICSI后24h仍无受精征象的卵母细胞共计200个,分别采用上述5种方法进行激活处理。16-18h后观察第二极体(PB)排出及原核(PN)形成情况。激活后正常受精的胚胎继续培养3-5天。统计五组的激活率、原核形成情况、卵裂率及后期胚胎发育情况。采用荧光原位杂交(FISH)的方法对激活处理后正常受精发育而来的胚胎进行分析,排除孤雌激活可能。结果五种激活方法处理后的卵母细胞激活率分别为65.6, 75.6, 83.7, 88.2和6.9%,其中离子霉素+6-DMAP组激活率最高,两种激活剂联合激活的激活率要明显高于一种激活剂单独激活(P<0.05);除离子霉素+6-DMAP组激活处理后的一原核形成能力上要明显高于6-DMAP组之外,其他组之间在各种类型原核形成能力上均无明显统计学差异(P>0.05)。FISH分析了35个从2PN发育而来的胚胎,其中有12个胚胎显示为XX信号,10个胚胎显示为XY信号。结论通过人工辅助激活方法是可以使得ICSI后未受精的人卵母细胞恢复正常受精,并且有继续发育的潜能;离子霉素+6-DMAP组的激活率最高,但在发育的潜能上各组之间并没有统计学上的差异。第二部分补救ICSI中人工辅助卵母细胞激活的探索研究目的探索补救ICSI中人工辅助卵母细胞激活技术的应用,是否可以提高受精率和改善胚胎后期的发育情况,并最终可应用于临床的可行性。方法收集常规IVF后无受精征象的人成熟卵母细胞共计148个,补救ICSI后,一组92个卵母细胞采用离子霉素+6-DMAP进行人工辅助激活处理,另一组56个未采用任何激活处理的作为对照组。16-18h后观察第二极体排出及原核形成情况。正常受精的胚胎继续培养3-5天。统计两组的受精率、原核形成情况、卵裂率及后期胚胎发育情况。采用荧光原位杂交(FISH)的方法对激活处理后2PN发育而来的胚胎进行分析,排除孤雌激活可能。结果实验组和对照组补救ICSI后受精率分别为89.1%(82/92)和78.6%(44/56),两组之间受精率比较有显著的统计学差异(P<0.05),正常受精(2PN)率分别为51.2%(42/82)和29.5%(13/44),也有显著的统计学差异(P<0.05)。但两组之间正常受精发育的胚胎在卵裂率、优质胚胎形成率上并没有显著差异(P>0.05)。FISH分析了实验组中12个从2PN发育而来的胚胎,其中4个为XY杂交信号,5个为XX杂交信号,性染色体正常的胚胎比例为75%。结论采用卵母细胞人工辅助激活可以提高补救ICSI的受精率,激活后受精的胚胎有进一步发育的潜能,FISH分析排除了孤雌激活,故人工辅助激活在改善补救ICSI的受精率上有一定的临床应用价值。