[研究背景]子宫是胚胎生长和发育的部位。巨噬细胞(macrophage, M(?))来源于血液中的单核细胞,是子宫的一种常驻免疫细胞,参与子宫局部免疫应答、免疫效应与免疫调节,对哺乳动物生殖功能,尤其是妊娠的建立和维持有着重要的作用。国内外学者对人和啮齿类动物正常月经周期/动情周期、妊娠期子宫巨噬细胞的密度和时空分布方式、迁移、分化及激活的调控及其分泌功能的探讨均提示巨噬细胞的功能和分布可能直接或间接的受到卵巢甾体性激素——雌孕激素的调控。雌、孕酮是妊娠建立和维持过程中起重要作用的激素。雌激素可使子宫内膜增生增厚,有助于提高子宫内膜对植入的敏感性,是启动胚胎着床的重要条件。孕酮在非妊娠期间由黄体细胞分泌,可使处于增生期的子宫内膜转化为分泌期,为受精卵的生存和着床提供适宜的环境。子宫内膜达到容受状态是成功妊娠的关键因素之一,此时子宫内膜结构、细胞组成及基因的表达等在雌孕激素的调节下均发生改变并且在时间和空间上达到高度的协调一致。目前,大量临床研究报道在体外受精-胚胎移植周期(IVF-ET)中过高的雌激素水平及孕激素水平对子宫内膜容受性产生影响,降低临床妊娠率。而围着床期子宫巨噬细胞数量和分布有着高度的时间和空间特异性,对子宫内膜容受性有着重要影响,围着床期巨噬细胞数量、活性及表型异常均可降低子宫内膜容受性。目前国内外关于雌、孕激素对子宫巨噬细胞的相关研究已有多项报道,但是研究的结果有所不同,其机制仍存在争议。关于超生理水平及生理水平雌激素或孕激素对子宫巨噬细胞的影响国内亦未见报道。因此本研究采用双侧卵巢切除小鼠模型(去势小鼠),外源性补充生理剂量及超生理剂量的雌激素或孕激素,研究雌、孕激素对子宫巨噬细胞数量、分布及功能的影响,并对其机制进行初步探讨,从而为进一步了解巨噬细胞在生殖生理学、生殖免疫学的作用,为解决生殖医学临床上迫切需要解决的着床障碍、器官移植提供新思路,为寻找和开发主动干预的免疫学新途径提供动物实验理论依据。[目的]建立双侧卵巢切除小鼠模型,分别从组织和细胞水平上,研究外源性补充不同浓度雌二醇和孕酮后小鼠子宫组织局部巨噬细胞的分布、数量和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)表达量的变化,探讨雌、孕激素对巨噬细胞数量和分布的影响及其可能的作用机制。[方法]取性发育成熟的雌鼠(体重30±2g)行双侧卵巢切除术(去势小鼠),术后第17天分别皮下注射生理剂量雌二醇(100ng/只)、超生理剂量雌二醇(1000ng/只)、生理剂量孕酮(2mg/只)、超生理剂量孕酮(20mg／只)0.1ml及芝麻油0.1ml(阴性对照组),未给予干预的去势小鼠作为空白对照组。分别于给药后6h、24h取子宫标本,利用HE染色观察组织形态和超微结构的变化；利用免疫组织化学方法定量研究不同浓度雌二醇、孕酮作用后各时间点子宫巨噬细胞数量、分布和M-CSF表达量的变化。[结果](1)小鼠子宫形态学观察、阴道脱落细胞特征变化观察以及外周血雌孕激素测定结果示小鼠去势后子宫明显萎缩、外阴及阴道脱落细胞失去周期性变化,呈动情间期样改变、血中雌孕激素水平较正常小鼠显著降低。上述结果提示去势小鼠模型成功建立。(2)免疫组织化学显示：空白对照组及阴性对照组F4／80+巨噬细胞数量极少,仅在子宫内膜基底部与肌膜交界处、肌膜和外膜零星可见；阴性对照组6h、24h子宫内膜、肌膜及外膜巨噬细胞数量与空白对照组无显著差异。与阴性对照组相比,外源性补充100ng、1000ng雌激素组给药后6h、24h子宫巨噬细胞数较阴性组均显著增加(P分别为0.000、0.003)。100ng、1000ng雌激素组给药后6h子宫巨噬细胞数与24h相比无显著差异(P分别为0.499、0.225)。对子宫各层巨噬细胞数进行分析：补充100ng及1000ng雌激素后6h、24h,子宫巨噬细胞分布未发现显著差异,即补充后6h子宫内膜、肌膜、外膜巨噬细胞数与阴性组相比显著增加；24h后子宫肌膜及外膜巨噬细胞与阴性对照组相比显著增加,内膜巨噬细胞无显著差异。(3)免疫组织化学显示：与阴性对照组相比,外源性补充孕酮2mg后24h子宫巨噬细胞显著增加(P=0.006),6h后有增高趋势,但差异无统计学意义(P=0.123)；补充20mg孕酮后6h子宫巨噬细胞显著增加(P=0.012),24h后子宫巨噬细胞与阴性对照组无显著差异(P=0.129)。对子宫各层巨噬细胞数进行分析,补充2mg孕酮后6h,子宫内膜、肌膜、外膜巨噬细胞数与阴性组无显著差异；24h后子宫内膜及肌膜巨噬细胞显著增加。补充20mg孕酮后6h,子宫肌膜巨噬细胞数显著增加(P=0.000),其余各层与阴性对照组无显著差异；24h后子宫各层较阴性对照组均无显著差异。(4)免疫组织化学显示：子宫内膜腺上皮、腔上皮、血管内皮、子宫肌层和外膜均可见M-CSF表达。空白对照组及阴性对照组M-CSF表达量少,两组间无统计学差异。外源性补充100ng、1000ng雌激素后6h、24h,小鼠子宫M-CSF的表达较阴性对照组表达均显著增强(P分别为0.001、0.008)。外源性补充100ng雌激素后24h子宫M-CSF表达较给药后6h表达量显著增加(P=0.044)。1000ng雌激素组6h与24h子宫M-CSF表达无显著差异。对子宫各层M-CSF表达量进行分析,补充100ng、1000ng雌激素后6h及24h子宫内膜、肌膜及外膜M-CSF表达较阴性对照组均显著增高(P=0.041)；皮下注射100ng雌激素后6h、24h后子宫各层M-CSF表达与100ng雌激素组比较无显著差异。(5)免疫组织化学显示：外源性补充孕激素2mg、20mg后6h子宫M-CSF表达较阴性对照组无显著增高(P=0.110)；24h后两个剂量组子宫M-CSF表达量均显著增高(P=0.001)。对子宫各层M-CSF表达量进行分析,补充2mg孕酮后6h子宫内膜M-CSF表达较阴性对照组显著增高(P=0.041)；24h后子宫各层M-CSF表达量较阴性对照组均显著增高。补充20mg孕酮后6h子宫各层M-CSF表达均未见显著增加,24h后子宫内膜、肌膜、外膜M-CSF表达较阴性对照组均显著增加。皮下注射20mg后6h、24h后M-CSF表达与2mg组比较无显著差异(6)生理剂量及超生理剂量雌激素或孕激素作用后,F4/80+巨噬细胞的数量与M-CSF表达量在整个子宫的变化趋势基本一致,但小鼠子宫内F4/80巨噬细胞数量和M-CSF表达量均无显著相关(雌激素组：γ=0.498,P=0.152；孕激素组：γ=-0.051,P=0.889)。[结论](1)、生理及超生理剂量雌激素、孕激素对子宫巨噬细胞均有趋化作用。(2)、生理剂量及超生理剂量孕激素子宫巨噬细胞的时空分布存在差异。超生理水平孕激素可能通过改变巨噬细胞的时间一空间分布,从而影响子宫内膜着床窗的开放时间。(3)、超生理浓度雌激素及孕激素诱导M-CSF表达的效果与生理剂量无显著差异。(4)、雌、孕激素可能通过诱导子宫内多种巨噬细胞趋化因子的表达,来实现对巨噬细胞数量、分布及功能的调控。