本实验采用组织块和酶消化法分离山羊乳腺上皮细胞，对纯化的细胞进行单细胞克隆并鉴定，采用二次回归正交旋转组合试验设计，MTT显色法定量探索山羊乳腺上皮细胞培养的最适条件，酶联免疫吸附实验与聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定乳腺上皮细胞是否具有正常的生理功能，最终成功建立了山羊乳腺上皮细胞系。 试验一使用组织块和酶消化法分离山羊乳腺细胞，结果表明组织块培养可以分离纯化出增殖能力较强的上皮细胞，Ⅰ型胶原酶和透明质酸酶联合使用可获得较纯的上皮细胞，贴壁后增殖能力较强，但多次传代后细胞增殖能力有所下降。刮除法、相差消化法以及相差贴壁法三种方法联合使用，经过2-3次传代可以得到细胞形态均一的乳腺上皮细胞。 试验二本实验进行乳腺上皮细胞单细胞克隆，发现口吸管法、克隆环法和细胞稀释法细胞克隆率分别为O、5.9％和3.5％，一共得到3株细胞克隆，形态学观察与细胞角蛋白18鉴定为乳腺腺泡上皮细胞。克隆环法细胞克隆率最高，但是操作很难熟练进行，易导致克隆细胞的不纯。细胞稀释法操作简单易行，对细胞伤害小，克隆率较高。 试验三采用五因素五水平的二次回归正交旋转组合试验设计，MTT显色法定量研究不同浓度的胎牛血清(FBS)、氢化可的松、胰岛素、转铁蛋白、表皮生长因子(EGF)对山羊乳腺上皮细胞生长的影响，研究发现山羊乳腺上皮细胞培养的最适条件为12％胎牛血清、4μg/ml氢化可的松、10μg/ml胰岛素、8μg/ml转铁蛋白及6ng/ml表皮生长因子的DMEM/F12。 试验四使用催乳素诱导种在铺有胶原的培养板中的山羊乳腺上皮细胞，采用ELISA法检测细胞上清液中β-酪蛋白的表达检测，培养48hβ-酪蛋白含量为0.5mg/ml，72h为0.75mg/ml。聚丙烯酰胺凝胶电泳进一步证明β-酪蛋白的分泌。说明本实验所获得的山羊乳腺上皮细胞具有正常的生理功能。